应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 2.3kb 大片段pcr 求赐教
51/1返回列表
查看: 2631  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hailey

银虫 (小有名气)

[求助] 2.3kb 大片段pcr 求赐教 已有4人参与

请路过的虫友大神们看看，我的片段是2.3kb的，GC 含量是59.61%  ，所以就没用GC buffer 。
所用PCR体系25ul  ,
10*transtart buffer 2.5ul
transtart Taq  ase    0.5ul
dNTPs  1ul
primer1  1ul
primer    1ul
cDNA   2ul
dd 水  17ul  

95度 5min
94度 30s
51度 -61度  设置梯度 各30s
72度 2.5min
72度 10min
35个循环

没有P出来目的条带，什么都没有，本想上传图片的，网络不好没有上传成功

求赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
时刻为梦想而战！！
1楼 2014-06-02 00:19:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-02 07:34:15
换cDNA模板。
2.3k不大，cDNA模板质粒不高通常是P不出来的原因。另外，cDNA是有组织特异性的，你的基因确定在这个组织或细胞系中有比较高的表达？

嗯嗯。。。是有高表达的，可以查到相关文献的，今天准备加10* GC  enhanger 试试..
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
3楼2014-06-02 09:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-02 10:49:45
换cDNA模板。
2.3k不大，cDNA模板质粒不高通常是P不出来的原因。另外，cDNA是有组织特异性的，你的基因确定在这个组织或细胞系中有比较高的表达？
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-02 07:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hailey at 2014-06-02 09:12:30
嗯嗯。。。是有高表达的，可以查到相关文献的，今天准备加10* GC  enhanger 试试.....

之前的回答，打错字了，囧
是cDNA质量不高
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-02 09:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-02 09:19:40
之前的回答，打错字了，囧
是cDNA质量不高...

还是没有目的条带，有较明显的条带，但不是我想要的，杂带还是多。。。
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
5楼2014-06-02 15:15:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭