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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3700bp大片段PCR的问题。。。急
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 3700bp大片段PCR的问题。。。急 已有14人参与

如题，3700bp的片段做PCR，一直无法正确P出，请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦
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1楼 2014-01-19 14:42:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:24:14
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:39
片段较大，最好用高保真酶，我通常用phusion，速度快，15-30s/kb
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3楼2014-01-19 18:02:56
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普通回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2014-01-19 19:24:06
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:26
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2楼2014-01-19 16:23:32
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yulong4444 at 2014-01-19 16:23:32
takara 的lataq 是不错的选择  我的4K左右  效果不错

保真性也好吗?
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4楼2014-01-19 19:15:07
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:05
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:51
phusion 还是不错的，就是退火温度比较高，条件比较苛刻，需要摸索条件。LA Tag 扩长片段还是可以的，就是速度会比较慢。但是容易出现突变，还是建议用高保真的酶。
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5楼2014-01-19 21:08:33
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:08
不知道你的模板是什么  我用的是一个phanta的高保真酶  前几天扩一个6k的都扩出来了
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6楼2014-01-19 21:18:57
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:12
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:59
phusion很好用，保真性也还好。HF buffer扩不出来，可以换GC buffer试一下。
对于不好扩增的片段，延伸时间可以给到1kb/min。
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7楼2014-01-19 23:07:50
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wanzi2222

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:16
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:50:07
fastpfu 刚用 8000都没有问题
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8楼2014-01-20 01:35:13
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wanzi2222 at 2014-01-20 01:35:13
fastpfu 刚用 8000都没有问题

谢谢
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9楼2014-01-22 18:23:43
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liuqiuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

艾德莱的taq酶不错，便宜效果好。

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10楼2014-01-22 18:52:51
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