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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3700bp大片段PCR的问题。。。急
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281080371

银虫 (小有名气)
学习……

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11楼2014-01-22 18:55:40
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700bp不是很大的，我普通克的都在4KB，如果就是亚克隆的话takara的LA Taq酶足够了，如果是克隆的话可以再选保真度高的酶。
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没有SB的事，只有SB的人
12楼2014-01-24 00:39:03
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

TOYOBO的 KOD FX NEO效果很好，曾经扩过8kb的，没有突变，循环数要少一点
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13楼2014-01-24 08:48:10
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gengce

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

扩不出来就先不要用高保真的，用lataq就不错，如果再出不来，就加倍镁离子浓度

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14楼2014-01-24 09:22:31
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

Fast PFU很好用，又高效，连T载体记得加A.

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15楼2014-01-24 09:51:17
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double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

ltakara 的lataq还行，如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr
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早已不承认还有什么神
16楼2014-01-24 10:52:33
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by double可 at 2014-01-24 10:52:33
ltakara 的lataq还行，如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr

谢谢
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17楼2014-01-24 15:28:47
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by huguangdong at 2014-01-24 09:51:17
Fast PFU很好用，又高效，连T载体记得加A.

谢谢
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18楼2014-01-24 15:28:58
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们用KOD Fx 克隆一个8Kb的水稻基因构建互补载体，送3个测序，有一个没有完全没有突变。
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19楼2014-01-25 01:09:14
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700的片段不算短，但也不是特别长，根据我的经验普通taq，extaq,lataq都可以，如果你需要序列准确的话可以考虑后两种（个人推荐extaq），phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外，P不出来不一定是酶的问题，退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来，前者可以做touchdown解决，后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
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20楼2014-01-26 09:37:14
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