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281080371

银虫 (小有名气)

学习……

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-01-22 18:55:40
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700bp不是很大的,我普通克的都在4KB,如果就是亚克隆的话takara的LA Taq酶足够了,如果是克隆的话可以再选保真度高的酶。
没有SB的事,只有SB的人
12楼2014-01-24 00:39:03
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

TOYOBO的 KOD FX NEO效果很好,曾经扩过8kb的,没有突变,循环数要少一点
13楼2014-01-24 08:48:10
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gengce

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

扩不出来就先不要用高保真的,用lataq就不错,如果再出不来,就加倍镁离子浓度

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-01-24 09:22:31
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

Fast PFU很好用,又高效,连T载体记得加A.

[ 发自小木虫客户端 ]
15楼2014-01-24 09:51:17
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double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

ltakara 的lataq还行,如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr
早已不承认还有什么神
16楼2014-01-24 10:52:33
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by double可 at 2014-01-24 10:52:33
ltakara 的lataq还行,如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr

谢谢
17楼2014-01-24 15:28:47
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by huguangdong at 2014-01-24 09:51:17
Fast PFU很好用,又高效,连T载体记得加A.

谢谢
18楼2014-01-24 15:28:58
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们用KOD Fx 克隆一个8Kb的水稻基因构建互补载体,送3个测序,有一个没有完全没有突变。
19楼2014-01-25 01:09:14
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700的片段不算短,但也不是特别长,根据我的经验普通taq,extaq,lataq都可以,如果你需要序列准确的话可以考虑后两种(个人推荐extaq),phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外,P不出来不一定是酶的问题,退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来,前者可以做touchdown解决,后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
20楼2014-01-26 09:37:14
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