应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3700bp大片段PCR的问题。。。急
212/3返回列表上一页123下一页
查看: 2627  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

281080371

银虫 (小有名气)
学习……

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
11楼2014-01-22 18:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700bp不是很大的，我普通克的都在4KB，如果就是亚克隆的话takara的LA Taq酶足够了，如果是克隆的话可以再选保真度高的酶。
赞一下 回复此楼
没有SB的事，只有SB的人
12楼2014-01-24 00:39:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

TOYOBO的 KOD FX NEO效果很好，曾经扩过8kb的，没有突变，循环数要少一点
赞一下 回复此楼
13楼2014-01-24 08:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gengce

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

扩不出来就先不要用高保真的，用lataq就不错，如果再出不来，就加倍镁离子浓度

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
14楼2014-01-24 09:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

Fast PFU很好用，又高效，连T载体记得加A.

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2014-01-24 09:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

ltakara 的lataq还行，如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr
赞一下 回复此楼
早已不承认还有什么神
16楼2014-01-24 10:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by double可 at 2014-01-24 10:52:33
ltakara 的lataq还行，如果还是pcr不出来的话可以做拼接pcr

谢谢
回复此楼
17楼2014-01-24 15:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by huguangdong at 2014-01-24 09:51:17
Fast PFU很好用，又高效，连T载体记得加A.

谢谢
回复此楼
18楼2014-01-24 15:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们用KOD Fx 克隆一个8Kb的水稻基因构建互补载体，送3个测序，有一个没有完全没有突变。
赞一下 回复此楼
19楼2014-01-25 01:09:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700的片段不算短，但也不是特别长，根据我的经验普通taq，extaq,lataq都可以，如果你需要序列准确的话可以考虑后两种（个人推荐extaq），phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外，P不出来不一定是酶的问题，退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来，前者可以做touchdown解决，后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
赞一下 回复此楼
20楼2014-01-26 09:37:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liulugang 的主题更新
212/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +33 医学老男孩 2026-08-13 78/3900 2026-08-17 13:22 by ziyangfang
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭