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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3700bp大片段PCR的问题。。。急
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 3700bp大片段PCR的问题。。。急 已有14人参与

如题，3700bp的片段做PCR，一直无法正确P出，请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦
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1楼 2014-01-19 14:42:58
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700的片段不算短，但也不是特别长，根据我的经验普通taq，extaq,lataq都可以，如果你需要序列准确的话可以考虑后两种（个人推荐extaq），phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外，P不出来不一定是酶的问题，退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来，前者可以做touchdown解决，后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
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20楼2014-01-26 09:37:14
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2014-01-19 19:24:06
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:26
本帖仅楼主可见
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2楼2014-01-19 16:23:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-19 19:24:14
liulugang: 金币+1, ★有帮助 2014-03-10 09:49:39
片段较大，最好用高保真酶，我通常用phusion，速度快，15-30s/kb
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3楼2014-01-19 18:02:56
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yulong4444 at 2014-01-19 16:23:32
takara 的lataq 是不错的选择  我的4K左右  效果不错

保真性也好吗?
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4楼2014-01-19 19:15:07
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