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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 3700bp大片段PCR的问题。。。急已有14人参与

如题,3700bp的片段做PCR,一直无法正确P出,请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3700的片段不算短,但也不是特别长,根据我的经验普通taq,extaq,lataq都可以,如果你需要序列准确的话可以考虑后两种(个人推荐extaq),phusion也可以但是这酶对条件要求比较严格。另外,P不出来不一定是酶的问题,退火温度、延伸时间不合适都有可能P不出来,前者可以做touchdown解决,后者一般按1k 1min的速度计算一般不会出问题。
20楼2014-01-26 09:37:14
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2014-01-19 19:24:06
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:26
本帖仅楼主可见
2楼2014-01-19 16:23:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-19 19:24:14
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:39
片段较大,最好用高保真酶,我通常用phusion,速度快,15-30s/kb
3楼2014-01-19 18:02:56
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yulong4444 at 2014-01-19 16:23:32
takara 的lataq 是不错的选择  我的4K左右  效果不错

保真性也好吗?
4楼2014-01-19 19:15:07
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