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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 3700bp大片段PCR的问题。。。急 已有14人参与

如题,3700bp的片段做PCR,一直无法正确P出,请问选择什么酶和相应体系可以p出这种大片段。。。望解答。。谢谢啦
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-19 19:24:14
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:39
片段较大,最好用高保真酶,我通常用phusion,速度快,15-30s/kb
3楼2014-01-19 18:02:56
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普通回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

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liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:26
本帖仅楼主可见
2楼2014-01-19 16:23:32
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yulong4444 at 2014-01-19 16:23:32
takara 的lataq 是不错的选择  我的4K左右  效果不错

保真性也好吗?
4楼2014-01-19 19:15:07
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:05
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:51
phusion 还是不错的,就是退火温度比较高,条件比较苛刻,需要摸索条件。LA Tag 扩长片段还是可以的,就是速度会比较慢。但是容易出现突变,还是建议用高保真的酶。
5楼2014-01-19 21:08:33
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:08
不知道你的模板是什么  我用的是一个phanta的高保真酶  前几天扩一个6k的都扩出来了
6楼2014-01-19 21:18:57
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:12
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:49:59
phusion很好用,保真性也还好。HF buffer扩不出来,可以换GC buffer试一下。
对于不好扩增的片段,延伸时间可以给到1kb/min。
7楼2014-01-19 23:07:50
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wanzi2222

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-20 15:45:16
liulugang: 金币+1, 有帮助 2014-03-10 09:50:07
fastpfu 刚用 8000都没有问题
8楼2014-01-20 01:35:13
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wanzi2222 at 2014-01-20 01:35:13
fastpfu 刚用 8000都没有问题

谢谢
9楼2014-01-22 18:23:43
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liuqiuning

木虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

艾德莱的taq酶不错,便宜效果好。

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-01-22 18:52:51
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