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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请大家帮忙，p不出条带
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 请大家帮忙，p不出条带 已有1人参与

我的目的条带138bp，做PCR怎么也做不出来，用上次的引物（与这次引物只有酶切位点不同，其他都一样）就能P出来，做了下引物交叉，结果上游没问题，下游那组P不出来，现怀疑是引物合成问题，结果重新合成的引物还是P不出来,对照P出来了。我就不明白了，相差的只有酶切切位点，为什么上次的就能P出来，这次的怎么也P不出来。有遇到这种问题的吗?
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1楼 2014-05-27 17:02:41
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 17:29:16
1 所用DNA或者cDNA降解严重，建议重新做反转录，或者重新提取RNA，RNA一般只能放1-3个月
2 引物具有随机性，多P几次就哦了

第一条应该不是，因为对照P出来了，用的是一样的模版。现在只能参考第二条试试了
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3楼2014-05-27 18:49:32
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 所用DNA或者cDNA降解严重，建议重新做反转录，或者重新提取RNA，RNA一般只能放1-3个月
2 引物具有随机性，多P几次就哦了
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 17:29:16
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