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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 请大家帮忙,p不出条带 已有1人参与

我的目的条带138bp,做PCR怎么也做不出来,用上次的引物(与这次引物只有酶切位点不同,其他都一样)就能P出来,做了下引物交叉,结果上游没问题,下游那组P不出来,现怀疑是引物合成问题,结果重新合成的引物还是P不出来,对照P出来了。我就不明白了,相差的只有酶切切位点,为什么上次的就能P出来,这次的怎么也P不出来。有遇到这种问题的吗?
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1 所用DNA或者cDNA降解严重,建议重新做反转录,或者重新提取RNA,RNA一般只能放1-3个月
2 引物具有随机性,多P几次就哦了
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 17:29:16
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 17:29:16
1 所用DNA或者cDNA降解严重,建议重新做反转录,或者重新提取RNA,RNA一般只能放1-3个月
2 引物具有随机性,多P几次就哦了

第一条应该不是,因为对照P出来了,用的是一样的模版。现在只能参考第二条试试了
3楼2014-05-27 18:49:32
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