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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助~关于引物降解问题
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助~关于引物降解问题 已有5人参与

我上个月做分子标记都能出条带，而且条带清晰，中间有半个月没做，等我这个月再做的时候发现有些引物P不出条带，有些引物P出来的条带非常模糊，亮度很差。应该不是体系和退火温度的问题，条件跟上个月的相同。我用的引物在-20存放了一年半，是用双蒸水稀释的，100µmol/L。会不会在这半个月期间引物降解了呢？还是其它什么原因？请各位大侠不吝赐教~
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1楼 2010-07-08 14:50:53
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
你设对照了吗，确定是引物的原因，一般放-20度不会那么容易降解吧
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2楼2010-07-08 15:13:14
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该不会是引物的原因，更有可能是模板的问题，是同一批模板吗？稀释倍数一致吗？什么条件保存的？
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3楼2010-07-08 15:18:24
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 15:18:24:
应该不会是引物的原因，更有可能是模板的问题，是同一批模板吗？稀释倍数一致吗？什么条件保存的？

还是用的以前的模板，用双蒸水稀释40倍后-20保存的，我重新稀释一下试试~
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4楼2010-07-08 16:02:45
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 15:18:24:
应该不会是引物的原因，更有可能是模板的问题，是同一批模板吗？稀释倍数一致吗？什么条件保存的？

我做过一个重复，一个有清晰地条带，重复的那个什么都没有，为什么呢？确定没有少加东西，可能加的量因为手法问题不太一致
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5楼2010-07-08 16:09:41
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 菜鸟难当 at 2010-07-08 16:09:41:

我做过一个重复，一个有清晰地条带，重复的那个什么都没有，为什么呢？确定没有少加东西，可能加的量因为手法问题不太一致

模板放到4°的话保存的话，有可能出问题的，我感觉引物的问题不大。
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6楼2010-07-12 13:44:50
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nmhsd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物-20放一年应该没有问题，dNTP容易出问题，建议更换新的。
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7楼2012-07-14 22:31:40
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