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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助~关于引物降解问题已有5人参与

我上个月做分子标记都能出条带,而且条带清晰,中间有半个月没做,等我这个月再做的时候发现有些引物P不出条带,有些引物P出来的条带非常模糊,亮度很差。应该不是体系和退火温度的问题,条件跟上个月的相同。我用的引物在-20存放了一年半,是用双蒸水稀释的,100µmol/L。会不会在这半个月期间引物降解了呢?还是其它什么原因?请各位大侠不吝赐教~
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

你设对照了吗,确定是引物的原因,一般放-20度不会那么容易降解吧
2楼2010-07-08 15:13:14
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该不会是引物的原因,更有可能是模板的问题,是同一批模板吗?稀释倍数一致吗?什么条件保存的?
3楼2010-07-08 15:18:24
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 15:18:24:
应该不会是引物的原因,更有可能是模板的问题,是同一批模板吗?稀释倍数一致吗?什么条件保存的?

还是用的以前的模板,用双蒸水稀释40倍后-20保存的,我重新稀释一下试试~
4楼2010-07-08 16:02:45
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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-08 15:18:24:
应该不会是引物的原因,更有可能是模板的问题,是同一批模板吗?稀释倍数一致吗?什么条件保存的?

我做过一个重复,一个有清晰地条带,重复的那个什么都没有,为什么呢?确定没有少加东西,可能加的量因为手法问题不太一致
5楼2010-07-08 16:09:41
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xyls6868

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 菜鸟难当 at 2010-07-08 16:09:41:

我做过一个重复,一个有清晰地条带,重复的那个什么都没有,为什么呢?确定没有少加东西,可能加的量因为手法问题不太一致

模板放到4°的话保存的话,有可能出问题的,我感觉引物的问题不大。
6楼2010-07-12 13:44:50
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nmhsd

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物-20放一年应该没有问题,dNTP容易出问题,建议更换新的。
7楼2012-07-14 22:31:40
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