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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3’端race菌落PCR体系的问题
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

[求助] 3’端race菌落PCR体系的问题已有1人参与

最近我的是Takara的3’Race试剂盒做了一段3’端RacePCR，将产物回收连接到T载体上，在转化到大肠杆菌中进行蓝白斑筛选，那么然后如何进行菌落PCR进行阳性克隆的筛选？PCR体系是怎么选择的？按常规PCR的体系可以吗？还是按照3’Race试剂盒中的体系？
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1楼2014-05-27 13:07:42
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 16:52:13
1.按照3’Race试剂盒中的体系
2.筛选后提取质粒，然后PCR鉴定即可
3.也可以一起做，保险，就是累点

说错了，我要做菌液PCR，那是按照试剂盒中第一次PCR的体系做？还是按照第二次PCR的体系做？第一次PCR是没有加入dNTP的。
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3楼2014-05-27 17:04:34
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 18:53:13
1.按照3’Race试剂盒中的体系
2.筛选后提取质粒，然后PCR鉴定即可
3.也可以一起做，保险，就是累点
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 16:52:13
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冰糖-葫芦娃 at 2014-05-27 17:04:34
说错了，我要做菌液PCR，那是按照试剂盒中第一次PCR的体系做？还是按照第二次PCR的体系做？第一次PCR是没有加入dNTP的。...

那应该是第二次的，不加入dNTPs是不行的，做下看看吧，不行给我发站内信。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
4楼2014-05-27 17:10:36
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