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一桶稀泥木虫 (正式写手)
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克隆基因，总是少28bp 已有7人参与
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大家好，我克隆一个全长513bp的基因，连完载体菌液送测序总是少28bp，后来送PCR产物，发现也是少28bp,从条带上来看也看不出来，跑胶没有不特异的条带，有附图；最后一张附图是我截取的基因序列前面一部分，划线部分是缺失的28bp,另外缺失序列后面紧接着的28bp只有一个碱基不同，会不会测序有什么影响，另外缺失的碱基数不是3的倍数，很奇怪？谢谢大侠们了 PCR全长.jpg  酶切（ECOR1）.jpg  基因部分序列.jpg |
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 分子生化实验经验积累 | 重复序列PCR扩增 |
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【答案】应助回帖
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一桶稀泥(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-05-29 13:10:25
一桶稀泥(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-05-29 13:10:25
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如果从不同品种来源的基因组，那很可能存在等位变异，因此可以从不同品种或不同基因型的黄瓜中克隆你的目的基因。 是否单拷贝可以如你所说的做，既然黄瓜基因组都测序完成，那这个基因应该很好查到定位的。也可以参考其它物种这个基因的相关研究。（拿到基因一般都要在NCBI里搜索一番，看看相关序列，然后做个系统分析，预测一下基因功能啥的。） 你的基因如果编码区真缺失了28bp，除非是不编码蛋白的基因，或者在内含子区，否则就是个假基因了吧。 如果重复PCR都缺失28bp，那就不是PCR问题了。  都不知道你的模板是基因组还是cDNA，如果cDNA就不存在内含子的因素了。 |
15楼2014-05-28 12:49:18
万丽丽081222
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