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一桶稀泥

木虫 (正式写手)

[求助] 克隆基因,总是少28bp已有7人参与

大家好,我克隆一个全长513bp的基因,连完载体菌液送测序总是少28bp,后来送PCR产物,发现也是少28bp,从条带上来看也看不出来,跑胶没有不特异的条带,有附图;最后一张附图是我截取的基因序列前面一部分,划线部分是缺失的28bp,另外缺失序列后面紧接着的28bp只有一个碱基不同,会不会测序有什么影响,另外缺失的碱基数不是3的倍数,很奇怪?谢谢大侠们了

克隆基因,总是少28bp
PCR全长.jpg


克隆基因,总是少28bp-1
酶切(ECOR1).jpg


克隆基因,总是少28bp-2
基因部分序列.jpg
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我是小女孩,让着我点!!!
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物设计是不是有问题?如果引物有问题,会导致酶切位点的变化,出现切错的可能。
8楼2014-05-27 17:07:28
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 一桶稀泥 at 2014-05-28 00:09:37
上游从起始密码子开始一段,下游终子密码子开始的反向互补的一段,应该没问题,另外今天我用3%的胶电泳,发现确实在500以下,我用5个不同品种去pcr,结果都一样,在500一下,说明pcr出了问题,不知道怎么办才好
...

再仔细看看,有没有漏掉碱基?
24楼2014-05-30 09:22:43
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