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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆基因，总是少28bp
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一桶稀泥

木虫 (正式写手)

[求助] 克隆基因，总是少28bp 已有7人参与

大家好，我克隆一个全长513bp的基因，连完载体菌液送测序总是少28bp，后来送PCR产物，发现也是少28bp,从条带上来看也看不出来，跑胶没有不特异的条带，有附图；最后一张附图是我截取的基因序列前面一部分，划线部分是缺失的28bp,另外缺失序列后面紧接着的28bp只有一个碱基不同，会不会测序有什么影响，另外缺失的碱基数不是3的倍数，很奇怪？谢谢大侠们了

克隆基因，总是少28bp
PCR全长.jpg


克隆基因，总是少28bp-1
酶切（ECOR1）.jpg


克隆基因，总是少28bp-2
基因部分序列.jpg
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我是小女孩，让着我点！！！
1楼 2014-05-27 09:20:48
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:13:31
你展示的基因序列和你克隆基因所用的材料是相同来源的么？
这个基因在基因组中是单拷贝的么？
重复克隆如果都少，那可能是模板本身的问题
我的经验，测序出现缺失这么长片段的概率很低，几乎不可能。
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5楼2014-05-27 13:32:07
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一桶稀泥

木虫 (正式写手)
想知道各位能看到图片吗？我怎么看不到，第一次发图片贴，请多多指教
赞一下 回复此楼
我是小女孩，让着我点！！！
2楼2014-05-27 09:22:49
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万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:13:16
可以看到图。你这个少的28bp的片段是在中间还是在首位啊？如果在首位的首位的话，我觉得可能和测序有关，建议你把目的片段连到载体上，然后用载体的通用引物为引物采用双向测序的方法对目的片段进行测序。
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learnenglish
3楼2014-05-27 11:08:41
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一桶稀泥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 万丽丽081222 at 2014-05-27 11:08:41
可以看到图。你这个少的28bp的片段是在中间还是在首位啊？如果在首位的首位的话，我觉得可能和测序有关，建议你把目的片段连到载体上，然后用载体的通用引物为引物采用双向测序的方法对目的片段进行测序。

从起始密码子开始的第61个位置开始缺失，我截图的是从起始密码子开始的，我也链接到T3载体上了，正向测序结果是缺失的，没有试双向测序。测序可能性会不会很大呢？
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我是小女孩，让着我点！！！
4楼2014-05-27 11:26:49
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