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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆基因，总是少28bp
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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一桶稀泥(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-05-29 13:11:14
多下载几个序列分析看看，确认下是不是正常都有这28bp的2个重复序列。然后再判断其他的。实在需要得到有重复序列的基因，省事的话就是委托合成，自己做的话就参考18楼的在重复序列两端分别设计加入BsaI之类内切酶的引物，扩增上下游2个都带了重复序列的片段，再酶切连接得到目的序列。
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为什么
21楼2014-05-28 18:53:57
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
20楼: Originally posted by 一桶稀泥 at 2014-05-28 18:10:42
你好，全基因合成以后可以转基因吧哈哈...

是完全没有问题的，蛋白质序列对就行
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
22楼2014-05-28 22:41:46
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-29 13:17:25
那含有28bp片段的基因你是从哪里获得的序列呢？
如果你确信有这个片段，把你实验室的酶全部拿来试一试。
或者你换一对引物试一试。
既然这个基因没有内含子，直接用基因组DNA扩增看看哈。
我以前克隆的基因内部有很多18bp重复，但是都没有缺失过（已知序列，只是克隆验证）。
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23楼2014-05-29 11:08:39
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 一桶稀泥 at 2014-05-28 00:09:37
上游从起始密码子开始一段，下游终子密码子开始的反向互补的一段，应该没问题，另外今天我用3%的胶电泳，发现确实在500以下，我用5个不同品种去pcr，结果都一样，在500一下，说明pcr出了问题，不知道怎么办才好
...

再仔细看看，有没有漏掉碱基？
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24楼2014-05-30 09:22:43
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