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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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一桶稀泥(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-05-29 13:11:14
多下载几个序列分析看看,确认下是不是正常都有这28bp的2个重复序列。然后再判断其他的。实在需要得到有重复序列的基因,省事的话就是委托合成,自己做的话就参考18楼的在重复序列两端分别设计加入BsaI之类内切酶的引物,扩增上下游2个都带了重复序列的片段,再酶切连接得到目的序列。
为什么
21楼2014-05-28 18:53:57
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
20楼: Originally posted by 一桶稀泥 at 2014-05-28 18:10:42
你好,全基因合成以后可以转基因吧哈哈...

是完全没有问题的,蛋白质序列对就行
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
22楼2014-05-28 22:41:46
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-29 13:17:25
那含有28bp片段的基因你是从哪里获得的序列呢?
如果你确信有这个片段,把你实验室的酶全部拿来试一试。
或者你换一对引物试一试。
既然这个基因没有内含子,直接用基因组DNA扩增看看哈。
我以前克隆的基因内部有很多18bp重复,但是都没有缺失过(已知序列,只是克隆验证)。
23楼2014-05-29 11:08:39
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 一桶稀泥 at 2014-05-28 00:09:37
上游从起始密码子开始一段,下游终子密码子开始的反向互补的一段,应该没问题,另外今天我用3%的胶电泳,发现确实在500以下,我用5个不同品种去pcr,结果都一样,在500一下,说明pcr出了问题,不知道怎么办才好
...

再仔细看看,有没有漏掉碱基?
24楼2014-05-30 09:22:43
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