应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆基因，总是少28bp
21/1返回列表
查看: 2750  |  回复: 23
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一桶稀泥

木虫 (正式写手)

[求助] 克隆基因，总是少28bp 已有7人参与

大家好，我克隆一个全长513bp的基因，连完载体菌液送测序总是少28bp，后来送PCR产物，发现也是少28bp,从条带上来看也看不出来，跑胶没有不特异的条带，有附图；最后一张附图是我截取的基因序列前面一部分，划线部分是缺失的28bp,另外缺失序列后面紧接着的28bp只有一个碱基不同，会不会测序有什么影响，另外缺失的碱基数不是3的倍数，很奇怪？谢谢大侠们了

克隆基因，总是少28bp
PCR全长.jpg


克隆基因，总是少28bp-1
酶切（ECOR1）.jpg


克隆基因，总是少28bp-2
基因部分序列.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 重复序列PCR扩增

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我是小女孩，让着我点！！！
1楼 2014-05-27 09:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一桶稀泥(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-05-29 13:11:14
多下载几个序列分析看看，确认下是不是正常都有这28bp的2个重复序列。然后再判断其他的。实在需要得到有重复序列的基因，省事的话就是委托合成，自己做的话就参考18楼的在重复序列两端分别设计加入BsaI之类内切酶的引物，扩增上下游2个都带了重复序列的片段，再酶切连接得到目的序列。
赞一下 回复此楼
为什么
21楼2014-05-28 18:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一桶稀泥 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭