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sxy900803

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1730.9
散金: 200
帖子: 185
在线: 135.2小时
虫号: 1245767
注册: 2011-03-26
性别: MM
专业: 环境工程

[求助] 菌液PCR出现问题了已有14人参与

本人最近做菌液PCR，老是没有目标条带，而是像图中所示那样，是为什么呢？求助大家，帮帮忙，很急！
我的是10ul的体系：Takara的Taq酶 0.25ul,
                           dNTP mixture 1ul,
                           10xPCR Buffer 5ul,
                           引物各1ul,加灭菌蒸馏水至10ul,
                           菌液4ul.
引物用的是PMD-19T载体的通用引物：RV-M和M13-47.
恳请遇到过类似情况的童鞋帮帮忙！谢谢大家了！

}Z47[FAC0SFFJ`VZH4`J`_B.jpg

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1楼2014-04-08 17:04:31

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电魂

铜虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 41.6
帖子: 19
在线: 17.6小时
虫号: 1108548
注册: 2010-09-26
专业: 系统生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

给你两点建议：1，改变你的PCR体系为20ul，10xPCR Buffer加2ul（1xPCR Buffer为工作浓度），菌液加2ul就够了（你的点样孔这么亮就是模版加多了），最后加水补足至20ul。你开始的体系问题很大。2，PMD-19T好像没有RV-M的引物结合位点吧，你换成M13+（-47）和M13-（-48）多好，也可以用PCR扩增引物看是否能扩出目的条带。