应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 急，求各位帮忙分析原因，关于pcr与跑胶的问题
61/1返回列表
查看: 1297  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

意萧02

木虫 (正式写手)

[求助] 急，求各位帮忙分析原因，关于pcr与跑胶的问题 已有2人参与

各位虫友大家好，本人刚接触做水稻QTL的课题，在pcr与连续聚丙烯凝胶电泳时出现问题了，请给位帮忙分析原因，在此先谢谢了。

我做的目标DNA片段大约50bP左右。pcr体系分别为：
ddH2O                    3.2ul
混合酶（买的）       5ul（每分钟扩增1-2kB，预混loading buffer装)
引物                         1ul
模板DNA                  0.8ul

PCR参数：
94度         5min
94度         45s
55度         45s
72度         90s
72度         7min
4度           无穷

聚丙烯酰胺凝胶电泳配置(每板）：
H20                                 30ml
母液（40%丙烯酰胺）    6ml
50xTAE缓冲液                 300ul
10% APS                         300ul
TEMED                            25ul
上样量1.6ul  电压120v  90min
结果有的可以跑出条带，有的模糊不清，几乎没有，还有拖带现象，具体如下图所示，三图来自不同的三种引物。
DNA样，混合酶等问题可以排除，请问还可能问题出在哪？是引物的问题吗？

急，求各位帮忙分析原因，关于pcr与跑胶的问题
不能跑出.jpg


急，求各位帮忙分析原因，关于pcr与跑胶的问题-1
不能跑出条带.jpg


急，求各位帮忙分析原因，关于pcr与跑胶的问题-2
可以跑出条带.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-02 18:39:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-02 21:16:09
你点marker了吗，没有的话也不好说是胶的问题还是PCR的问题，如果marker是清晰的，那胶没有问题。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-02 20:07:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意萧02

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-04-02 20:07:12
你点marker了吗，没有的话也不好说是胶的问题还是PCR的问题，如果marker是清晰的，那胶没有问题。

点了，marker没问题哦
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-02 20:13:37
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-04-02 20:13:37
点了，marker没问题哦...

那可能是引物不特异，你提高退火温度试试，或者做个梯度。再不行就得优化引物
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-02 20:19:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

D调的小E

铁杆木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
意萧02: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-03 16:03:05
意萧02(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-03 19:22:23
感觉应该是引物特异性不强，同意楼上的，做个梯度PCR验证一下吧
赞一下 回复此楼
You just need a little faith!
5楼2014-04-03 10:30:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lz能给张大图不，看的我眼都花了，还有Mark在吗。可以标出来不？
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
6楼2014-04-04 14:01:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 意萧02 的主题更新
61/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +9 llllkkkhh 2026-03-18 9/450 2026-03-19 07:40 by BruceLiu320
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭