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重叠延伸PCR 已有3人参与
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| 本人刚开始做重叠延伸PCR，现在在用重叠延伸PCR做点突变，之后要做表达用，两端有酶切位点。现在有一些问题，想请各位解答。我扩两条目的条带的时候，尝试了多个退火温度，但是条带都不单一，并且目的条带的量很少，请问如何才能使目的条带的单一且量增加啊？另外，进行融合的时候，我见贴子上说退火温度高一点，延伸时间长一点，进行5个循环，我想请教第一轮反应如何设置啊？是按正常的反应95℃ 5min，95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min，进行5个循环，再72℃ 10min，4℃ 10min，是这样么？退火温度怎么设置啊？第二轮反应，也是按上边的方法么？请各位前辈给于解答，非常感谢。 |
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