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心强我强

铜虫 (正式写手)

[求助] 用什么方法去除一个基因中的一段序列

各位虫友,刚开始做分子这块儿,不懂的很多。目的是去除一个已知基因一段已知的序列,请问采用什么方法呢,谢谢!我不知道该从哪里开始着手,请各位赐教,谢谢!
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走过的路是平的,坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞!
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
心强我强: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢你的回复! 2012-07-22 23:13:04
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-23 15:43:41
设计一个引物,引物的前半部分和基因上半部分同源,下半部分和基因后半部分同源,然后分别PCR获得两个片段,将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。
2楼2012-07-22 22:29:46
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普通回帖

心强我强

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2012-07-22 22:29:46
设计一个引物,引物的前半部分和基因上半部分同源,下半部分和基因后半部分同源,然后分别PCR获得两个片段,将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。

可不可以说的细一些呢,比如思路原理,还想请教一下先开始的一对引物得到的两个片段有什么目的?
走过的路是平的,坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞!
3楼2012-07-22 23:22:28
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beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
心强我强: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢!非常感谢! 2012-07-24 09:23:32
利用目的基因上下游序列作同源臂,构建基因敲除组件,转化后通过同源重组破坏目的基因。
4楼2012-07-23 16:32:42
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心强我强

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-23 16:32:42
利用目的基因上下游序列作同源臂,构建基因敲除组件,转化后通过同源重组破坏目的基因。

嗯,请问有没有相关文献呢,基础不好,一头雾水呢。
走过的路是平的,坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞!
5楼2012-07-24 09:28:52
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beer胖

新虫 (小有名气)

文献很多
数据库搜   overlap pcr   或融合pcr
6楼2012-07-24 16:05:42
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心强我强

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-24 16:05:42
文献很多
数据库搜   overlap pcr   或融合pcr

O ,好的,谢谢!
走过的路是平的,坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞!
7楼2012-07-25 09:19:35
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

套叠PCR可以做的 看你目的干嘛用的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2012-07-25 11:12:44
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sd3824289

木虫 (正式写手)

楼主可以去看看重叠延伸PCR,或许对你有所帮助!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
9楼2012-07-25 16:12:53
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心强我强

铜虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-25 16:12:53
楼主可以去看看重叠延伸PCR,或许对你有所帮助!

好的,灰常感谢!还想请问,通过重叠延伸PCR,得到的是粘性末端还是平末端?
走过的路是平的,坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞!
10楼2012-07-26 12:33:21
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