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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用什么方法去除一个基因中的一段序列
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心强我强

铜虫 (正式写手)

[求助] 用什么方法去除一个基因中的一段序列

各位虫友，刚开始做分子这块儿，不懂的很多。目的是去除一个已知基因一段已知的序列，请问采用什么方法呢，谢谢！我不知道该从哪里开始着手，请各位赐教，谢谢！
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
1楼 2012-07-22 19:59:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心强我强: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢你的回复! 2012-07-22 23:13:04
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-23 15:43:41
设计一个引物，引物的前半部分和基因上半部分同源，下半部分和基因后半部分同源，然后分别PCR获得两个片段，将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。
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2楼2012-07-22 22:29:46
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普通回帖

心强我强

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2012-07-22 22:29:46
设计一个引物，引物的前半部分和基因上半部分同源，下半部分和基因后半部分同源，然后分别PCR获得两个片段，将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。

可不可以说的细一些呢，比如思路原理，还想请教一下先开始的一对引物得到的两个片段有什么目的？
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
3楼2012-07-22 23:22:28
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beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心强我强: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢！非常感谢! 2012-07-24 09:23:32
利用目的基因上下游序列作同源臂，构建基因敲除组件，转化后通过同源重组破坏目的基因。
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4楼2012-07-23 16:32:42
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心强我强

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-23 16:32:42
利用目的基因上下游序列作同源臂，构建基因敲除组件，转化后通过同源重组破坏目的基因。

嗯，请问有没有相关文献呢，基础不好，一头雾水呢。
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
5楼2012-07-24 09:28:52
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beer胖

新虫 (小有名气)
文献很多
数据库搜   overlap pcr   或融合pcr
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6楼2012-07-24 16:05:42
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心强我强

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by beer胖 at 2012-07-24 16:05:42
文献很多
数据库搜   overlap pcr   或融合pcr

O ,好的，谢谢！
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
7楼2012-07-25 09:19:35
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
套叠PCR可以做的 看你目的干嘛用的
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心强我强
8楼2012-07-25 11:12:44
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sd3824289

木虫 (正式写手)
楼主可以去看看重叠延伸PCR，或许对你有所帮助！
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心强我强 心强我强
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
9楼2012-07-25 16:12:53
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心强我强

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-07-25 16:12:53
楼主可以去看看重叠延伸PCR，或许对你有所帮助！

好的，灰常感谢！还想请问，通过重叠延伸PCR，得到的是粘性末端还是平末端？
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
10楼2012-07-26 12:33:21
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