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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用什么方法去除一个基因中的一段序列
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心强我强

铜虫 (正式写手)

[求助] 用什么方法去除一个基因中的一段序列

各位虫友，刚开始做分子这块儿，不懂的很多。目的是去除一个已知基因一段已知的序列，请问采用什么方法呢，谢谢！我不知道该从哪里开始着手，请各位赐教，谢谢！
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
1楼 2012-07-22 19:59:50
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心强我强

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 脱水拂空 at 2012-07-25 11:12:44
套叠PCR可以做的 看你目的干嘛用的

谢谢，目的就是一个基因中的去掉一段序列，然后将其连接到载体上，转染到细胞中，考查去掉的这段序列对表达和功能是否有影响。实验室跟我讲，我大概就理解这么多。
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
12楼2012-07-26 12:37:17
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心强我强: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢你的回复! 2012-07-22 23:13:04
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-23 15:43:41
设计一个引物，引物的前半部分和基因上半部分同源，下半部分和基因后半部分同源，然后分别PCR获得两个片段，将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。
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2楼2012-07-22 22:29:46
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心强我强

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2012-07-22 22:29:46
设计一个引物，引物的前半部分和基因上半部分同源，下半部分和基因后半部分同源，然后分别PCR获得两个片段，将这两个片段再通过重叠PCR扩增获得中间片段敲除的基因。

可不可以说的细一些呢，比如思路原理，还想请教一下先开始的一对引物得到的两个片段有什么目的？
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走过的路是平的，坚持自己所选择的。。。学会在暴雨中跳舞！
3楼2012-07-22 23:22:28
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beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心强我强: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢！非常感谢! 2012-07-24 09:23:32
利用目的基因上下游序列作同源臂，构建基因敲除组件，转化后通过同源重组破坏目的基因。
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4楼2012-07-23 16:32:42
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