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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR出现这样的问题，如何解决？
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huala2013

银虫 (著名写手)

[求助] PCR出现这样的问题，如何解决？ 已有4人参与

PCR跑不出条带来，一片弥散，出现这样的问题，该怎么解决？急急急！
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1楼 2014-03-04 11:32:11
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-04 11:53:20
huala2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-04 11:59:02
你这是根本没扩出来

我都郁闷了一段时间

可能原因
1模板的问题
2引物的问题
3条件的问题
如果你的条带跑不出孔来，是1和2
如果跑出来，是2和3
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天行健
2楼2014-03-04 11:47:43
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-04 11:53:27
huala2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-04 11:59:12
只分析结果，首先你要从Marker来判断跑胶有没有问题，胶没问题就去分析你的PCR引物，试剂，模版，PCR程序。一般情况下是引物不够好。
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学习使你立于不败之地
3楼2014-03-04 11:50:10
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huala2013

银虫 (著名写手)
引物都是文献报道的，条件也是按照文献说的做的，只有1个带有条带，其他就是没有条带，烦啊！
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4楼2014-03-04 11:54:58
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huala2013

银虫 (著名写手)
我把图片传下。
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  • 附件 1 : PCR结果.jpg
    • 2014-03-04 11:57:52, 19 K
5楼2014-03-04 11:57:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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huala2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-04 14:58:32
可能你的模板合成的不好，也可能有基因组污染，建议先提高退火温度试试
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-03-04 11:57:57
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huala2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-04 14:59:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by huala2013 at 2014-03-04 11:54:58
引物都是文献报道的，条件也是按照文献说的做的，只有1个带有条带，其他就是没有条带，烦啊！

文献里公布的引物，特别是特异引物，就没几个靠谱的。文献里能够采用的只有通用引物可行性比较大。
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7楼2014-03-04 12:06:31
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
huala2013: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-04 14:58:47
引用回帖:
4楼: Originally posted by huala2013 at 2014-03-04 11:54:58
引物都是文献报道的，条件也是按照文献说的做的，只有1个带有条带，其他就是没有条带，烦啊！

全部按照文献来做的话，具体到实际会有很多控制不到的条件，比如实验室仪器（PCR仪），试剂还有差别呢，用别人的引物来扩增你的模版跑不出来也不是稀罕事。看你的图应该是结合度不好。
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学习使你立于不败之地
8楼2014-03-04 12:58:49
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
文献里公布的引物，是他自己根据自己的序列设计的，你的序列跟他的不一定完全一样，在别的区域有可能不好。
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9楼2014-03-04 14:36:46
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huala2013

银虫 (著名写手)
谢谢大家！大家觉得这种情况，下一步如何做好？
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10楼2014-03-04 14:59:31
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