24小时热门版块排行榜    

查看: 2822  |  回复: 3

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序正确,但是酶切没有条带,而且重组质粒位置不对 已有2人参与

做连接转化后,提取质粒,没有酶切或者pcr检测直接送测序,片段2500bp,正向测序回来有900bp左右,比对后完全一样。为了论文里面的图片,重新进行酶切检测,双酶切后发现没有插入片段,而且目的片段与质粒加起来应该是8000bp左右,但是电泳结果竟然有15000,这是为什么呢?上样的loading buffer为6
x,染料在buffer中,按比例添加loading buffer 染色颜色太浅,故多加了点loading  buffer,这会对结果造成影响吗?请高手们赐教!谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 20:28:01
夏末忆雪: 金币+5, 有帮助 2014-04-19 23:03:27
做个克隆,测序才测了一半不到就敢用了?还敢往论文里加。。。

你这个,目前听你的描述,不知道是不是你的质粒压根没有被切开,这种没切开的质粒,如果是超螺旋,会比大小小,要是成大圈了,就可以跑得很慢。
你先上一个没有酶切的质粒当control,看看你切了和没切有没有区别再说。

loading一般情况下无所谓。
2楼2014-03-31 20:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 20:16:21
做个克隆,测序才测了一半不到就敢用了?还敢往论文里加。。。

你这个,目前听你的描述,不知道是不是你的质粒压根没有被切开,这种没切开的质粒,如果是超螺旋,会比大小小,要是成大圈了,就可以跑得很慢。
你 ...

因为我要连两个片段共表达,师哥说最后的时候在测通,公司最多测800到1000,现在测了一半序列都是对的,师哥说接着向下做。我觉得什么地方出问题了,但是找不到原因。对照我做了,未酶切,双酶切,两个单酶切,图的样子都对,就是条带的大小不对。
3楼2014-04-01 00:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我中箭了

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
夏末忆雪: 金币+5, 有帮助 2014-04-19 23:03:37
染料添加在6X loading buffer 中,会影响DNA迁移速率,导致条带位置不对,bp size 越大,影响越大。建议把染料加入琼脂糖中。
4楼2014-04-18 16:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏末忆雪 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见