应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对
41/1返回列表
查看: 2819  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对 已有2人参与

做连接转化后，提取质粒，没有酶切或者pcr检测直接送测序，片段2500bp，正向测序回来有900bp左右，比对后完全一样。为了论文里面的图片，重新进行酶切检测，双酶切后发现没有插入片段，而且目的片段与质粒加起来应该是8000bp左右，但是电泳结果竟然有15000，这是为什么呢？上样的loading buffer为6
x，染料在buffer中，按比例添加loading buffer 染色颜色太浅，故多加了点loading  buffer，这会对结果造成影响吗？请高手们赐教！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 20:07:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:28:01
夏末忆雪: 金币+5, ★有帮助 2014-04-19 23:03:27
做个克隆，测序才测了一半不到就敢用了？还敢往论文里加。。。

你这个，目前听你的描述，不知道是不是你的质粒压根没有被切开，这种没切开的质粒，如果是超螺旋，会比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。
你先上一个没有酶切的质粒当control，看看你切了和没切有没有区别再说。

loading一般情况下无所谓。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-31 20:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 20:16:21
做个克隆，测序才测了一半不到就敢用了？还敢往论文里加。。。

你这个，目前听你的描述，不知道是不是你的质粒压根没有被切开，这种没切开的质粒，如果是超螺旋，会比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。
你 ...

因为我要连两个片段共表达，师哥说最后的时候在测通，公司最多测800到1000，现在测了一半序列都是对的，师哥说接着向下做。我觉得什么地方出问题了，但是找不到原因。对照我做了，未酶切，双酶切，两个单酶切，图的样子都对，就是条带的大小不对。
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-01 00:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我中箭了

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
夏末忆雪: 金币+5, ★有帮助 2014-04-19 23:03:37
染料添加在6X loading buffer 中，会影响DNA迁移速率，导致条带位置不对，bp size 越大，影响越大。建议把染料加入琼脂糖中。
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-18 16:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏末忆雪 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭