应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对
51/1返回列表
查看: 3218  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对 已有2人参与

做连接转化后，提取质粒，没有酶切或者pcr检测直接送测序，片段2500bp，正向测序回来有900bp左右，比对后完全一样。为了论文里面的图片，重新进行酶切检测，双酶切后发现没有插入片段，而且目的片段与质粒加起来应该是8000bp左右，但是电泳结果竟然有15000，这是为什么呢？上样的loading buffer为6
x，染料在buffer中，按比例添加loading buffer 染色颜色太浅，故多加了点loading  buffer，这会对结果造成影响吗？请高手们赐教！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 20:07:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏末忆雪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 20:16:21
做个克隆，测序才测了一半不到就敢用了？还敢往论文里加。。。

你这个，目前听你的描述，不知道是不是你的质粒压根没有被切开，这种没切开的质粒，如果是超螺旋，会比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。
你 ...

因为我要连两个片段共表达，师哥说最后的时候在测通，公司最多测800到1000，现在测了一半序列都是对的，师哥说接着向下做。我觉得什么地方出问题了，但是找不到原因。对照我做了，未酶切，双酶切，两个单酶切，图的样子都对，就是条带的大小不对。
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-01 00:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:28:01
夏末忆雪: 金币+5, ★有帮助 2014-04-19 23:03:27
做个克隆，测序才测了一半不到就敢用了？还敢往论文里加。。。

你这个，目前听你的描述，不知道是不是你的质粒压根没有被切开，这种没切开的质粒，如果是超螺旋，会比大小小，要是成大圈了，就可以跑得很慢。
你先上一个没有酶切的质粒当control，看看你切了和没切有没有区别再说。

loading一般情况下无所谓。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-31 20:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我中箭了

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
夏末忆雪: 金币+5, ★有帮助 2014-04-19 23:03:37
染料添加在6X loading buffer 中，会影响DNA迁移速率，导致条带位置不对，bp size 越大，影响越大。建议把染料加入琼脂糖中。
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-18 16:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭