24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1959  |  回复: 14

wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] PCR的带不清楚。。。大家帮忙看看图片,看看问题出在哪里了。。 已有4人参与

我是菌根的。。。最近做PCR。。共做了三次了,,
最上边的一张图前八个是DNA样,后边两个PCR产品,这次用的电压是110V,跑了30min..体系是50ul.
primer 20uM 个1ul...MyTaq master Mix 25ul..DNA 6ul 和5ul..剩下的用PCR water补齐..电泳时加的量5ul PCR products..5 ul Orange G..
.第二张图
其中两个样没有条带。。电压85V。。25ul 体系。。前四个样 primer各0.5ul (10uM)后四个样 primer各0.5ul (20uM)..MyTaq master Mix;12.5ul,
1ul DNA        电泳 PCR products 3ul   Orange G 3ul
第二张图
。电压85V。。25ul 体系。。 primer各0.5ul (20uM)..MyTaq master Mix;12.5ul, 1ul DNA   电泳 PCR products 2ul   Orange G 2ul
我的体系设置由问题吗?
还有就是我的MyTaq Master Mix...回来在室温下呆了一天,会不会由影响。。谢谢各位了。。第一次做PCR

PCR的带不清楚。。。大家帮忙看看图片,看看问题出在哪里了。。


PCR的带不清楚。。。大家帮忙看看图片,看看问题出在哪里了。。-1
IMG_0710.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

有点矛盾。有点纠结
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woolley

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 11:46:36
从你的描述来看,PCR的体系应该没有问题。
从胶图来看,PCR的产物浓度应该挺大的,你可以少上点样品,或者进行一下稀释。
目前看来有问题的是你的染料,你每次是等体积加入Orange G,不知道这个是为啥?惯例?还是按照说明书来的?从你胶图的条带来看,比较可能的是染料加多了,加上PCR产物很多,所以条带形状不好看。
建议你首先试一下减少染料的量,你可以只添加1/2,1/4,1/8正常添加量的染料,看看PCR效果如何。
2楼2014-03-28 09:16:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
条带很深,是不是跑胶加样加多了……
懒病又犯了……
3楼2014-03-28 09:44:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woolley at 2014-03-28 09:16:55
从你的描述来看,PCR的体系应该没有问题。
从胶图来看,PCR的产物浓度应该挺大的,你可以少上点样品,或者进行一下稀释。
目前看来有问题的是你的染料,你每次是等体积加入Orange G,不知道这个是为啥?惯例?还是 ...

恩,加燃料根据平时的惯例加得,他们做的DNA跑胶都是1⃣️比一加的,看起来没有问题,我今天试试...谢谢拉。那你说我的产物可以去测序吗
有点矛盾。有点纠结
4楼2014-03-28 13:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱上鱼…… at 2014-03-28 09:44:15
条带很深,是不是跑胶加样加多了……

我第一次➕的5ul,现在改道2ul了
有点矛盾。有点纠结
5楼2014-03-28 14:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woolley at 2014-03-28 09:16:55
从你的描述来看,PCR的体系应该没有问题。
从胶图来看,PCR的产物浓度应该挺大的,你可以少上点样品,或者进行一下稀释。
目前看来有问题的是你的染料,你每次是等体积加入Orange G,不知道这个是为啥?惯例?还是 ...

恩,加燃料根据平时的惯例加得,他们做的DNA跑胶都是1⃣️比一加的,看起来没有问题,我今天试试...谢谢拉。那你说我的产物可以去测序吗
有点矛盾。有点纠结
6楼2014-03-28 14:49:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woolley

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-03-28 14:49:02
恩,加燃料根据平时的惯例加得,他们做的DNA跑胶都是1⃣️比一加的,看起来没有问题,我今天试试...谢谢拉。那你说我的产物可以去测序吗...

可以去测序,除了第三块胶的第三道(有条带的道,从左开始数)好像有些杂条带,不过关系不大。
7楼2014-03-28 16:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-30 22:32:22
你的marker呢?我前几天也出现这种情况,marker都拖带厉害,后来发现是染料是染料使用方法跟一般的不一样,你可以好好看看染料使用说明
8楼2014-03-29 21:10:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 小二郎 at 2014-03-29 21:10:38
你的marker呢?我前几天也出现这种情况,marker都拖带厉害,后来发现是染料是染料使用方法跟一般的不一样,你可以好好看看染料使用说明

我定的marker今天刚到,染料?是gel red吗?我做胶的时候,60ml TBE 1ul gel red,0.9克agarose....
有点矛盾。有点纠结
9楼2014-04-02 20:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wanglixia815 at 2014-04-02 20:02:34
我定的marker今天刚到,染料?是gel red吗?我做胶的时候,60ml TBE 1ul gel red,0.9克agarose.......

你跑下marker试试,如果marker都跑不好,就是你胶或者燃料的问题了,还有你的目的基因大概多长啊?为什么选择1.5%的胶浓度?
10楼2014-04-03 09:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wanglixia815 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297,工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 304求调剂 +5 castLight 2026-04-16 5/250 2026-04-16 21:49 by 学员JpLReM
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 346,工科0854求调剂,专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
信息提示
请填处理意见