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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒的提取及测序问题已有2人参与

最近在做转化,挑取阳性单克隆摇菌后,菌液PCR有目的片段(1800bp),提质粒,电泳发现无条带,可用该质粒做模板进行PCR能出现目的条带,送样进行测序,也总是反馈说信号太弱,这到底是怎么回事,还望各位大虾指点!
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
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2楼: Originally posted by dnvcqw at 2014-03-10 11:10:42
我觉得是不是需要确认一下做的胶是否正常,因为既然既然能用质粒pcr做出东西来,里面肯定还是存在着模板的,反应弱无非就是模板的浓度不够或者是引物结合的效率有问题,根据你的描述我觉得浓度的原因更大,可以用目 ...

恩,谢谢您的建议。今天我也咨询了华大的客服,他们说可能是质粒的浓度太低了,他建议我加大摇菌的量,我先用自己的引物试一下,看看会不会出结果,实在不行了,再大摇!
6楼2014-03-10 11:22:48
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by licunyu at 2014-03-10 11:15:03
会不会质粒浓度太低啊?楼主是单纯的质粒保种吗?还是构建的重组质粒?

我用的表达载体,想确定是否存在突变,然后直接做表达
7楼2014-03-10 11:24:31
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by _hwq at 2014-03-10 11:16:38
你用菌送去测序的吗?

是的
8楼2014-03-10 11:24:39
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