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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】BAC 质粒抽提
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zzw1221

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】BAC 质粒抽提 已有10人参与

omega 公司的E.Z.N.A.® BAC/PAC DNA Kit这个试剂盒有人用过吗，怎么样，盼告知，谢谢
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1楼 2010-07-01 19:16:48
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还行吧
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-01 22:17:46
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 22:30:19
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:04:51
lz说的这个kit是美国产的，说明书上有两种方法：一种是standard method，其实就是碱裂解+过柱纯化，适用于拷贝数比较高的质粒；另外一种适用于拷贝数低的质粒，碱裂解+乙醇沉淀，但比手工提取的效果要好。其中的任何一种方法都比手工提取的纯度要高，提取的核酸用来酶切和PCR没有问题。


lz有什么需要可以跟我站内联系。祝实验顺利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2010-7-1 at 22:25 ]
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-07-01 22:24:17
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tigertang

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:04
博士期间，做过好多亚克隆，就按分子克隆三的方法，50ml过夜菌，经典的方法总是蛮有效的。
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4楼2010-07-02 09:15:24
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:14
一直按照分子克隆上的方法，提取出来的DNA含有RNA，但是消化过夜就好了，对酶切、PCR也没有影响
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5楼2010-07-02 09:42:59
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zzw1221

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-02 09:42:59:
一直按照分子克隆上的方法，提取出来的DNA含有RNA，但是消化过夜就好了，对酶切、PCR也没有影响

谢谢，我用过，
pcr肯定没问题的，我要用来测序，我这个大于120kb， 低拷贝的，所以那个方法我改进了很多，效果还是不怎么好。十分感谢
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6楼2010-07-02 09:55:58
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:30:59
引用回帖:
谢谢你的回复，我准备用这个来抽BAC clone 的质粒 DNA,我要抽近200个样品的克隆，片段大于120kb，低拷贝的。因为用qiagen 以前提过一般100ml 得到最好总20－20微克的DNA.
我主要抽出来测序用的，不知道这个试剂盒按照他的说明上5ml菌液能得到多少产量呢。主要是价格上这个相对便宜点。谢谢你，你用过吗，实验顺利

呵呵~原来你给我发站内信了啊，直接在帖子上回复就行了，如果别人需要的话也可以看到。

你提到的这个kit说明书上写的可以提取》100kb的质粒，对于你120kb的质粒应该也是可以的。你的BAC clone虽然是低拷贝的，宿主菌应该是大肠吧，这样过夜培养后的菌量是很大的，得到的产量应该能达到数十微克。

我的菌生长缓慢，50ml菌液集菌后跟一般大肠的5ml菌量相当，能得到总量30多微克。

最后祝实验顺利！
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-07-02 10:09:58
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zzw1221

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 10:09:58:

呵呵~原来你给我发站内信了啊，直接在帖子上回复就行了，如果别人需要的话也可以看到。

你提到的这个kit说明书上写的可以提取》100kb的质粒，对于你120kb的质粒应该也是可以的。你的BAC clone虽然是低拷贝的 ...

兄弟，你用过的吗，5ml 我咋觉得能搞那么多，虽然测序也要不了这么多，能有5微克，我就够用了，

[ Last edited by zzw1221 on 2010-7-2 at 10:15 ]
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8楼2010-07-02 10:12:27
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-07-02 10:12:27:

兄弟，你用过的吗，5ml 我咋觉得能搞那么多，虽然测序也要不了这么多，能有5微克，我就够用了，

[ Last edited by zzw1221 on 2010-7-2 at 10:15 ]

用过。你就用5ml提吧，我也是估计的，有点不太准确。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
9楼2010-07-02 10:17:25
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zzw1221

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 10:17:25:

用过。你就用5ml提吧，我也是估计的，有点不太准确。

恩，谢谢了，明天再手提改进下，不行就买一个去了，少壮不努力，长大抽质粒啊
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10楼2010-07-02 10:21:50
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