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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重复做了3次，质粒提取正常，测序时总是“没信号”，大家有没遇到过这种情况？
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dinding

金虫 (小有名气)

[求助] 重复做了3次，质粒提取正常，测序时总是“没信号”，大家有没遇到过这种情况？ 已有3人参与

最近在提BAC质粒，所用试剂盒是OMEGA BAC/PAC DNA Isolation Kit。单克隆并经过过夜培养，并通过PCR鉴定，提取质粒之后浓度均在100以上（该试剂盒有两种方案，一种是碱裂解+过柱纯化，一种是碱裂解+乙醇沉析），本人两种方法都试过，但是送测序的时候就是“没信号”，送测序的公司是擎科。不知是什么原因！期待大神们帮忙解惑，在此谢过！
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1楼 2014-06-04 09:33:10
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-04 11:31:51
dinding: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-06-07 09:20:25
很正常，因为你用的是BAC 大质粒，给life techenolgy 测序（www.lifetechnologies.com公司）专门测BAC质粒，就解决了问题，但测BAC费用和普通不一样啊
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只要有梦想，坚持就一定能实现
2楼2014-06-04 10:21:24
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-04 11:31:58
dinding: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-06-07 09:20:33
给测序公司打电话，电话里说明你测序是BAC大质粒。
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只要有梦想，坚持就一定能实现
3楼2014-06-04 10:23:07
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dinding(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-04 16:25:51
dinding: 金币+3, ★有帮助 2014-06-07 09:20:46
你可以先跑胶看一看，有的时候有数据并不一定是你的质粒，跑电泳更直观也更具有说服力
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4楼2014-06-04 15:04:27
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lijing9510

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dinding: 金币+3, ★有帮助 2014-06-18 15:00:06
像BAC这种大质粒测序难度比较大，测序对纯度和浓度要求都很高，建议进一步浓缩一下质粒并提纯。或者换一下通用引物试一下。
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5楼2014-06-17 16:37:53
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