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dinding

金虫 (小有名气)

[求助] 重复做了3次,质粒提取正常,测序时总是“没信号”,大家有没遇到过这种情况? 已有3人参与

最近在提BAC质粒,所用试剂盒是OMEGA BAC/PAC DNA Isolation Kit。单克隆并经过过夜培养,并通过PCR鉴定,提取质粒之后浓度均在100以上(该试剂盒有两种方案,一种是碱裂解+过柱纯化,一种是碱裂解+乙醇沉析),本人两种方法都试过,但是送测序的时候就是“没信号”,送测序的公司是擎科。不知是什么原因!期待大神们帮忙解惑,在此谢过
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-04 11:31:51
dinding: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-06-07 09:20:25
很正常,因为你用的是BAC 大质粒,给life techenolgy 测序(www.lifetechnologies.com公司)专门测BAC质粒,就解决了问题,但测BAC费用和普通不一样啊
只要有梦想,坚持就一定能实现
2楼2014-06-04 10:21:24
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flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-04 11:31:58
dinding: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-06-07 09:20:33
给测序公司打电话,电话里说明你测序是BAC大质粒。
只要有梦想,坚持就一定能实现
3楼2014-06-04 10:23:07
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dinding(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-04 16:25:51
dinding: 金币+3, 有帮助 2014-06-07 09:20:46
你可以先跑胶看一看,有的时候有数据并不一定是你的质粒,跑电泳更直观也更具有说服力
4楼2014-06-04 15:04:27
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lijing9510

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dinding: 金币+3, 有帮助 2014-06-18 15:00:06
像BAC这种大质粒测序难度比较大,测序对纯度和浓度要求都很高,建议进一步浓缩一下质粒并提纯。或者换一下通用引物试一下。
5楼2014-06-17 16:37:53
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