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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】BAC 质粒抽提
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
zzw1221(金币+6): 2010-12-12 23:46:11
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Originally posted by zzw1221 at 2010-07-02 10:21:50:

恩，谢谢了，明天再手提改进下，不行就买一个去了，少壮不努力，长大抽质粒啊

祝实验好运啊，呵呵~
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
11楼2010-07-02 11:01:35
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jlk1990

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-01 22:24:17
lz说的这个kit是美国产的，说明书上有两种方法：一种是standard method，其实就是碱裂解+过柱纯化，适用于拷贝数比较高的质粒；另外一种适用于拷贝数低的质粒，碱裂解+乙醇沉淀，但比手工提取的效果要好。其中的任何 ...

兄弟，我今年研一也走上了提质粒的道路。手提两个星期了。碱裂解，第一天提出来了，之后越提越差。最后直接提出来的空白。buffer都换了个遍了。我已经怂了，再提不出来就有被辍学的危险了。大神救我好吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-08-31 17:48:41
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Edenberry

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12楼: Originally posted by jlk1990 at 2014-08-31 17:48:41
兄弟，我今年研一也走上了提质粒的道路。手提两个星期了。碱裂解，第一天提出来了，之后越提越差。最后直接提出来的空白。buffer都换了个遍了。我已经怂了，再提不出来就有被辍学的危险了。大神救我好吗
...

提质粒是很基础的分子实验吧，网上很容易找到相关资料。多练两次，别着急。
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13楼2014-09-01 11:12:58
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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12楼: Originally posted by jlk1990 at 2014-08-31 17:48:41
兄弟，我今年研一也走上了提质粒的道路。手提两个星期了。碱裂解，第一天提出来了，之后越提越差。最后直接提出来的空白。buffer都换了个遍了。我已经怂了，再提不出来就有被辍学的危险了。大神救我好吗
...

不知你提的是多大的质粒？拷贝数多少？
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
14楼2014-09-02 14:05:41
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jlk1990

新虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2014-09-02 14:05:41
不知你提的是多大的质粒？拷贝数多少？...

我提的也是大肠，插入片段也是120kb，楼主说的那个0mega的试剂盒我买了一个效果也很差。用提普通小质粒的却能提出来，不过量很小，每微升水里边就只有几纳克。也就是说我测序需要1000纳克需要提几百次。
    提质粒已经吐了，老板也不鸟我了，眼神中都是我屁事干不了。大神你真的能救我吗？总之我不论是手提还是试剂盒，质粒是能提出来。但是就是量太小！！！
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15楼2014-09-13 19:32:22
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jlk1990

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13楼: Originally posted by Edenberry at 2014-09-01 11:12:58
提质粒是很基础的分子实验吧，网上很容易找到相关资料。多练两次，别着急。...

不是小质粒，我提的bac,插入片段有120kb,已经提了半个多月了。大神有经验吗？求指点。。。。。
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16楼2014-09-13 19:35:06
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jlk1990

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大神你最后提出来了吗？有什么经验，手提的还是试剂盒的都行
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17楼2014-09-13 19:37:51
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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15楼: Originally posted by jlk1990 at 2014-09-13 19:32:22
我提的也是大肠，插入片段也是120kb，楼主说的那个0mega的试剂盒我买了一个效果也很差。用提普通小质粒的却能提出来，不过量很小，每微升水里边就只有几纳克。也就是说我测序需要1000纳克需要提几百次。
    提质 ...

omega的盒子是提10-100k的么？时间太长，我挤不太清楚了。如果商品化的试剂盒不给力的话，可以尝试用手提的方法。
给你一篇文献参考一下：徐建国，刘志奇，刘汉明。一种简单实用的适于大、小质粒的DNA提取方法。1991，微生物学通报。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
18楼2014-09-18 09:50:45
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)
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用epi公司的pcc1bac啊  加点诱导剂  我擦  那个质粒哇哇的高
手提个10ml多的吓人
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19楼2014-09-18 21:53:45
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danchengx

铜虫 (初入文坛)
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19楼: Originally posted by kuenyunliu at 2014-09-18 21:53:45
用epi公司的pcc1bac啊  加点诱导剂  我擦  那个质粒哇哇的高
手提个10ml多的吓人

咨询一下是什么诱导剂呢?
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努力
20楼2015-03-04 09:43:51
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