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zzw1221

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】BAC 质粒抽提 已有10人参与

omega 公司的E.Z.N.A.® BAC/PAC DNA Kit这个试剂盒有人用过吗,怎么样,盼告知,谢谢
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jlk1990

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2014-09-02 14:05:41
不知你提的是多大的质粒?拷贝数多少?...

我提的也是大肠,插入片段也是120kb,楼主说的那个0mega的试剂盒我买了一个效果也很差。用提普通小质粒的却能提出来,不过量很小,每微升水里边就只有几纳克。也就是说我测序需要1000纳克需要提几百次。
    提质粒已经吐了,老板也不鸟我了,眼神中都是我屁事干不了。大神你真的能救我吗?总之我不论是手提还是试剂盒,质粒是能提出来。但是就是量太小!!!
15楼2014-09-13 19:32:22
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查看全部 22 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 22:30:19
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:04:51
lz说的这个kit是美国产的,说明书上有两种方法:一种是standard method,其实就是碱裂解+过柱纯化,适用于拷贝数比较高的质粒;另外一种适用于拷贝数低的质粒,碱裂解+乙醇沉淀,但比手工提取的效果要好。其中的任何一种方法都比手工提取的纯度要高,提取的核酸用来酶切和PCR没有问题。


lz有什么需要可以跟我站内联系。祝实验顺利!

[ Last edited by zhaohq1209 on 2010-7-1 at 22:25 ]
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-07-01 22:24:17
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tigertang

木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:04
博士期间,做过好多亚克隆,就按分子克隆三的方法,50ml过夜菌,经典的方法总是蛮有效的。
4楼2010-07-02 09:15:24
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zemin_fang

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:14
一直按照分子克隆上的方法,提取出来的DNA含有RNA,但是消化过夜就好了,对酶切、PCR也没有影响
5楼2010-07-02 09:42:59
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