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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取后的检测方法
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qarallel

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取后的检测方法

如题   
最近在做藻类的质粒提取  以供后期的基因PCR和蛋白表达研究  
无奈所选基因在质粒上  可质粒提取后电泳总是没有结果  
不知是质粒提取不成功 还是本身拷贝数低  电泳无法检测到   
不知有没有其他别的检测方法   希望有做相关研究的不吝赐教
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学习
1楼 2013-11-16 13:04:02
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以测一下A260/280.
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轻描淡写，浓墨重彩。
2楼2013-11-16 20:16:05
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-23 14:56:27
如果质粒序列已知的话，设计一对引物，扩一下就知道了有没有顺利提取。
如果质粒序列未知，那就只能考虑使用毛细管电泳或者使用安捷伦的Bioanalyzer 2100这类机器做检测了
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3楼2013-11-17 11:43:23
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蓬鹏pinky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-23 14:56:30
如果用质粒小提试剂盒提的话，不要用它的EB洗脱，用灭好菌的dd水40-50ul洗脱即可。
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4楼2013-11-21 21:37:44
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wang23212

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:28
鉴定的话可以pcr 酶切 od值测定 nano测定 直接电泳是最直接的方法 没有的话很可能是没提出来千万别死按着说明书做

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5楼2013-11-21 23:28:13
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-16 20:16:05
可以测一下A260/280.

楼主，我也想请教一下，最近提质粒，测A260/280时，浓度1800ng/ul，比值也在1.8左右，但是电泳时，却无任何条带，请问这是怎么回事儿？测A260/280到底靠谱吗？
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6楼2013-12-23 09:36:25
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by yumupeipei at 2013-12-23 09:36:25
楼主，我也想请教一下，最近提质粒，测A260/280时，浓度1800ng/ul，比值也在1.8左右，但是电泳时，却无任何条带，请问这是怎么回事儿？测A260/280到底靠谱吗？...

你的浓度很高啊，不至于跑不出条带啊。还有，你确定你的浓度有这么高。我的一般在180就可以跑出很漂亮的条带了。
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轻描淡写，浓墨重彩。
7楼2013-12-23 09:40:02
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-23 09:40:02
你的浓度很高啊，不至于跑不出条带啊。还有，你确定你的浓度有这么高。我的一般在180就可以跑出很漂亮的条带了。...

我用酶标仪测的浓度就是这样的，具体准不准我也感到困惑！将我的菌液送去测序，公司给我的反馈直接就是提不出质粒，取消测序，我也不知道，明明做菌液PCR的时候有条带的。我现在都快崩溃了
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8楼2013-12-24 08:16:54
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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引用回帖:
8楼: Originally posted by yumupeipei at 2013-12-24 08:16:54
我用酶标仪测的浓度就是这样的，具体准不准我也感到困惑！将我的菌液送去测序，公司给我的反馈直接就是提不出质粒，取消测序，我也不知道，明明做菌液PCR的时候有条带的。我现在都快崩溃了...

PCR特异性并不是很强，有可能你的条带并非是质粒的。所以，一定要电泳是有条带的，才能定性的分析，260/280一般是在分析蛋白核酸时才能使用的手段。所以，最好再提一次质粒，确定能电泳跑出条带才可以。
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轻描淡写，浓墨重彩。
9楼2013-12-24 09:32:56
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