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qarallel

木虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取后的检测方法

如题   
最近在做藻类的质粒提取  以供后期的基因PCR和蛋白表达研究  
无奈所选基因在质粒上  可质粒提取后电泳总是没有结果  
不知是质粒提取不成功 还是本身拷贝数低  电泳无法检测到   
不知有没有其他别的检测方法   希望有做相关研究的不吝赐教
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以测一下A260/280.
轻描淡写,浓墨重彩。
2楼2013-11-16 20:16:05
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-23 14:56:27
如果质粒序列已知的话,设计一对引物,扩一下就知道了有没有顺利提取。
如果质粒序列未知,那就只能考虑使用毛细管电泳或者使用安捷伦的Bioanalyzer 2100这类机器做检测了
3楼2013-11-17 11:43:23
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蓬鹏pinky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-23 14:56:30
如果用质粒小提试剂盒提的话,不要用它的EB洗脱,用灭好菌的dd水40-50ul洗脱即可。
4楼2013-11-21 21:37:44
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wang23212

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:28
鉴定的话可以pcr 酶切 od值测定 nano测定 直接电泳是最直接的方法 没有的话很可能是没提出来千万别死按着说明书做

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-11-21 23:28:13
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-16 20:16:05
可以测一下A260/280.

楼主,我也想请教一下,最近提质粒,测A260/280时,浓度1800ng/ul,比值也在1.8左右,但是电泳时,却无任何条带,请问这是怎么回事儿?测A260/280到底靠谱吗?
6楼2013-12-23 09:36:25
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梧桐柒夕

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引用回帖:
6楼: Originally posted by yumupeipei at 2013-12-23 09:36:25
楼主,我也想请教一下,最近提质粒,测A260/280时,浓度1800ng/ul,比值也在1.8左右,但是电泳时,却无任何条带,请问这是怎么回事儿?测A260/280到底靠谱吗?...

你的浓度很高啊,不至于跑不出条带啊。还有,你确定你的浓度有这么高。我的一般在180就可以跑出很漂亮的条带了。
轻描淡写,浓墨重彩。
7楼2013-12-23 09:40:02
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yumupeipei

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-23 09:40:02
你的浓度很高啊,不至于跑不出条带啊。还有,你确定你的浓度有这么高。我的一般在180就可以跑出很漂亮的条带了。...

我用酶标仪测的浓度就是这样的,具体准不准我也感到困惑!将我的菌液送去测序,公司给我的反馈直接就是提不出质粒,取消测序,我也不知道,明明做菌液PCR的时候有条带的。我现在都快崩溃了
8楼2013-12-24 08:16:54
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梧桐柒夕

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引用回帖:
8楼: Originally posted by yumupeipei at 2013-12-24 08:16:54
我用酶标仪测的浓度就是这样的,具体准不准我也感到困惑!将我的菌液送去测序,公司给我的反馈直接就是提不出质粒,取消测序,我也不知道,明明做菌液PCR的时候有条带的。我现在都快崩溃了...

PCR特异性并不是很强,有可能你的条带并非是质粒的。所以,一定要电泳是有条带的,才能定性的分析,260/280一般是在分析蛋白核酸时才能使用的手段。所以,最好再提一次质粒,确定能电泳跑出条带才可以。
轻描淡写,浓墨重彩。
9楼2013-12-24 09:32:56
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