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质粒提取后的检测方法
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qarallel
木虫
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(幼儿园)
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专业: 检验医学
[
求助
]
质粒提取后的检测方法
如题
最近在做藻类的质粒提取 以供后期的基因PCR和蛋白表达研究
无奈所选基因在质粒上 可质粒提取后电泳总是没有结果
不知是质粒提取不成功 还是本身拷贝数低 电泳无法检测到
不知有没有其他别的检测方法 希望有做相关研究的不吝赐教
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【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷
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学习
1楼
2013-11-16 13:04:02
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梧桐柒夕
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8楼
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Originally posted by
yumupeipei
at 2013-12-24 08:16:54
我用酶标仪测的浓度就是这样的,具体准不准我也感到困惑!将我的菌液送去测序,公司给我的反馈直接就是提不出质粒,取消测序,我也不知道,明明做菌液PCR的时候有条带的。我现在都快崩溃了...
PCR特异性并不是很强,有可能你的条带并非是质粒的。所以,一定要电泳是有条带的,才能定性的分析,260/280一般是在分析蛋白核酸时才能使用的手段。所以,最好再提一次质粒,确定能电泳跑出条带才可以。
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9楼
2013-12-24 09:32:56
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梧桐柒夕
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感谢参与,应助指数 +1
可以测一下A260/280.
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2楼
2013-11-16 20:16:05
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soarrow
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酱油歪楼党
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流
2013-12-23 14:56:27
如果质粒序列已知的话,设计一对引物,扩一下就知道了有没有顺利提取。
如果质粒序列未知,那就只能考虑使用毛细管电泳或者使用安捷伦的Bioanalyzer 2100这类机器做检测了
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3楼
2013-11-17 11:43:23
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蓬鹏pinky
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专业: 生物大分子结构与功能
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★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流
2013-12-23 14:56:30
如果用质粒小提试剂盒提的话,不要用它的EB洗脱,用灭好菌的dd水40-50ul洗脱即可。
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4楼
2013-11-21 21:37:44
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