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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒大量提取的方法求助
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒大量提取的方法求助

最近用到实验室的一种质粒大量提取试剂盒：有这么一个操作步骤，“溶液1，,2，3操作后离心去上清液加冰预冷的异丙醇（0.6倍体积），沉淀一段时间后，离心，收集沉淀，用ddH2O 溶解后加等体积结合缓冲液，加入离心吸附柱”，实际上沉淀已经得到了质粒DNA ，在经过多次漂洗，难道不能得到较纯的质粒DNA 吗？经过一步离心吸附，也会损失不少质粒啊！还有就是现在市面常见的大提试剂盒最终得率怎么样啊？各自都有哪些标准数据来体现得率？
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1楼 2012-07-13 22:33:01
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yixinyuan: 金币+2, ★有帮助 2012-07-14 22:19:29
得率不知道，但是如果只用异丙醇沉淀的话，DNA是很杂的。
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2楼2012-07-14 17:58:56
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123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yixinyuan: 金币+2, ★有帮助 2012-07-14 22:21:19
亲，还要用氯仿哦！  不能光用异丙醇，效果不好！   大体质粒的效果很好的~~
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3楼2012-07-14 21:07:21
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-14 17:58:56
得率不知道，但是如果只用异丙醇沉淀的话，DNA是很杂的。

沉淀得到的DNA 确实很多杂质，那我还得加入其它什么试剂配合异丙醇来沉淀呢？怎么做呢？
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4楼2012-07-14 22:18:46
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 123n at 2012-07-14 21:07:21
亲，还要用氯仿哦！  不能光用异丙醇，效果不好！   大体质粒的效果很好的~~

氯仿要怎么样加入？跟异丙醇一起混合么?什么比例呢？
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5楼2012-07-14 22:21:10
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yixinyuan: 金币+2, ★有帮助 2012-07-15 22:39:19
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:56:38
大抽质粒的效果很好的，沉淀得到的产物可能杂质比较多，因此会重新溶解并再次结合上柱，这个过程损失肯定是会有的，但是平时小量抽的话，一般我们都会二次上柱，所以对得率影响不是很大
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6楼2012-07-15 12:05:06
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lt7510578

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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yixinyuan: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 21:20:26
本人一般质粒手提，试剂盒很少用，中间一步是氯仿/异戊醇=24：1混合抽提蛋白杂质，效果也行
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7楼2012-07-16 13:40:00
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