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yixinyuan

木虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒大量提取的方法求助

最近用到实验室的一种质粒大量提取试剂盒:有这么一个操作步骤,“溶液1,,2,3操作后离心去上清液加冰预冷的异丙醇(0.6倍体积),沉淀一段时间后,离心,收集沉淀,用ddH2O 溶解后加等体积结合缓冲液,加入离心吸附柱”,实际上沉淀已经得到了质粒DNA ,在经过多次漂洗,难道不能得到较纯的质粒DNA 吗?经过一步离心吸附,也会损失不少质粒啊!还有就是现在市面常见的大提试剂盒最终得率怎么样啊?各自都有哪些标准数据来体现得率?
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燕子9883

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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yixinyuan: 金币+2, 有帮助 2012-07-14 22:19:29
得率不知道,但是如果只用异丙醇沉淀的话,DNA是很杂的。
2楼2012-07-14 17:58:56
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123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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yixinyuan: 金币+2, 有帮助 2012-07-14 22:21:19
亲,还要用氯仿哦!  不能光用异丙醇,效果不好!   大体质粒的效果很好的~~
3楼2012-07-14 21:07:21
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕子9883 at 2012-07-14 17:58:56
得率不知道,但是如果只用异丙醇沉淀的话,DNA是很杂的。

沉淀得到的DNA 确实很多杂质,那我还得加入其它什么试剂配合异丙醇来沉淀呢?怎么做呢?
4楼2012-07-14 22:18:46
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 123n at 2012-07-14 21:07:21
亲,还要用氯仿哦!  不能光用异丙醇,效果不好!   大体质粒的效果很好的~~

氯仿要怎么样加入?跟异丙醇一起混合么?什么比例呢?
5楼2012-07-14 22:21:10
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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yixinyuan: 金币+2, 有帮助 2012-07-15 22:39:19
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-16 13:56:38
大抽质粒的效果很好的,沉淀得到的产物可能杂质比较多,因此会重新溶解并再次结合上柱,这个过程损失肯定是会有的,但是平时小量抽的话,一般我们都会二次上柱,所以对得率影响不是很大
6楼2012-07-15 12:05:06
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lt7510578

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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yixinyuan: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 21:20:26
本人一般质粒手提,试剂盒很少用,中间一步是氯仿/异戊醇=24:1混合抽提蛋白杂质,效果也行
7楼2012-07-16 13:40:00
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