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zzw1221

木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】BAC 质粒抽提已有10人参与

omega 公司的E.Z.N.A.® BAC/PAC DNA Kit这个试剂盒有人用过吗，怎么样，盼告知，谢谢

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1楼 2010-07-01 19:16:48

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:30:59

引用回帖:

谢谢你的回复，我准备用这个来抽BAC clone 的质粒 DNA,我要抽近200个样品的克隆，片段大于120kb，低拷贝的。因为用qiagen 以前提过一般100ml 得到最好总20－20微克的DNA.
我主要抽出来测序用的，不知道这个试剂盒按照他的说明上5ml菌液能得到多少产量呢。主要是价格上这个相对便宜点。谢谢你，你用过吗，实验顺利

呵呵~原来你给我发站内信了啊，直接在帖子上回复就行了，如果别人需要的话也可以看到。

你提到的这个kit说明书上写的可以提取》100kb的质粒，对于你120kb的质粒应该也是可以的。你的BAC clone虽然是低拷贝的，宿主菌应该是大肠吧，这样过夜培养后的菌量是很大的，得到的产量应该能达到数十微克。

我的菌生长缓慢，50ml菌液集菌后跟一般大肠的5ml菌量相当，能得到总量30多微克。

最后祝实验顺利！

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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。

7楼2010-07-02 10:09:58

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 22:30:19
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:04:51

lz说的这个kit是美国产的，说明书上有两种方法：一种是standard method，其实就是碱裂解+过柱纯化，适用于拷贝数比较高的质粒；另外一种适用于拷贝数低的质粒，碱裂解+乙醇沉淀，但比手工提取的效果要好。其中的任何一种方法都比手工提取的纯度要高，提取的核酸用来酶切和PCR没有问题。

lz有什么需要可以跟我站内联系。祝实验顺利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2010-7-1 at 22:25 ]

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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。

3楼2010-07-01 22:24:17

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