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zzw1221

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】BAC 质粒抽提 已有10人参与

omega 公司的E.Z.N.A.® BAC/PAC DNA Kit这个试剂盒有人用过吗,怎么样,盼告知,谢谢
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还行吧
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-01 22:17:46
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-01 22:30:19
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:04:51
lz说的这个kit是美国产的,说明书上有两种方法:一种是standard method,其实就是碱裂解+过柱纯化,适用于拷贝数比较高的质粒;另外一种适用于拷贝数低的质粒,碱裂解+乙醇沉淀,但比手工提取的效果要好。其中的任何一种方法都比手工提取的纯度要高,提取的核酸用来酶切和PCR没有问题。


lz有什么需要可以跟我站内联系。祝实验顺利!

[ Last edited by zhaohq1209 on 2010-7-1 at 22:25 ]
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-07-01 22:24:17
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tigertang

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:04
博士期间,做过好多亚克隆,就按分子克隆三的方法,50ml过夜菌,经典的方法总是蛮有效的。
4楼2010-07-02 09:15:24
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zemin_fang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:05:14
一直按照分子克隆上的方法,提取出来的DNA含有RNA,但是消化过夜就好了,对酶切、PCR也没有影响
5楼2010-07-02 09:42:59
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zzw1221

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-02 09:42:59:
一直按照分子克隆上的方法,提取出来的DNA含有RNA,但是消化过夜就好了,对酶切、PCR也没有影响

谢谢,我用过,
pcr肯定没问题的,我要用来测序,我这个大于120kb, 低拷贝的,所以那个方法我改进了很多,效果还是不怎么好。十分感谢
6楼2010-07-02 09:55:58
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

zzw1221(金币+1): 2010-07-02 10:30:59
引用回帖:
谢谢你的回复,我准备用这个来抽BAC clone 的质粒 DNA,我要抽近200个样品的克隆,片段大于120kb,低拷贝的。因为用qiagen 以前提过一般100ml 得到最好总20-20微克的DNA.
我主要抽出来测序用的,不知道这个试剂盒按照他的说明上5ml菌液能得到多少产量呢。主要是价格上这个相对便宜点。谢谢你,你用过吗,实验顺利

呵呵~原来你给我发站内信了啊,直接在帖子上回复就行了,如果别人需要的话也可以看到。

你提到的这个kit说明书上写的可以提取》100kb的质粒,对于你120kb的质粒应该也是可以的。你的BAC clone虽然是低拷贝的,宿主菌应该是大肠吧,这样过夜培养后的菌量是很大的,得到的产量应该能达到数十微克。

我的菌生长缓慢,50ml菌液集菌后跟一般大肠的5ml菌量相当,能得到总量30多微克。

最后祝实验顺利!
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-07-02 10:09:58
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zzw1221

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 10:09:58:

呵呵~原来你给我发站内信了啊,直接在帖子上回复就行了,如果别人需要的话也可以看到。

你提到的这个kit说明书上写的可以提取》100kb的质粒,对于你120kb的质粒应该也是可以的。你的BAC clone虽然是低拷贝的 ...

兄弟,你用过的吗,5ml 我咋觉得能搞那么多,虽然测序也要不了这么多,能有5微克,我就够用了,

[ Last edited by zzw1221 on 2010-7-2 at 10:15 ]
8楼2010-07-02 10:12:27
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-07-02 10:12:27:

兄弟,你用过的吗,5ml 我咋觉得能搞那么多,虽然测序也要不了这么多,能有5微克,我就够用了,

[ Last edited by zzw1221 on 2010-7-2 at 10:15 ]

用过。你就用5ml提吧,我也是估计的,有点不太准确。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
9楼2010-07-02 10:17:25
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zzw1221

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 10:17:25:

用过。你就用5ml提吧,我也是估计的,有点不太准确。

恩,谢谢了,明天再手提改进下,不行就买一个去了,少壮不努力,长大抽质粒啊
10楼2010-07-02 10:21:50
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