应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这个条带是肿么个情况啊？是构建成功不？
41/1返回列表
查看: 683  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangjingjing

木虫 (正式写手)

[求助] 这个条带是肿么个情况啊？是构建成功不？ 已有1人参与

这个是肿么个情况啊？我的目的基因做PCR的时候，条带在500~600bp之间
Sal1和Xho1双酶切（间隔39bp）以后连接PLNCX2载体，转化后挑单菌落，菌摇起来以后制备模板，分别用目的基因引物（590bp）和载体引物（175bp）扩增，下方最亮的条带就是500bp的~~~~~~~~~实验室的SYBR显色效果越来越差啊，望见谅
为嘛目的基因扩出来的再500bp左右，载体在600bp左右了？这个是非特异吗？可是同样的，别的几个菌落为啥木有呢？
这个条带是肿么个情况啊？是构建成功不？
目的基因扩增.jpg


这个条带是肿么个情况啊？是构建成功不？-1
载体扩增.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力打败一切
1楼 2013-12-23 19:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangjingjing(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:23:31
说明一下你的载体上的引物175bp是怎么回事？菌落PCR鉴定时可能有假阳性，需要做阴性对照并做进一步鉴定。此外，两个引物最好是一个在目的基因上，一个在载体上，减少假阳性的几率。实在不行，你可以挑几个阳性克隆，提质粒做酶切鉴定。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-23 23:17:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjingjing

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 23:17:28
说明一下你的载体上的引物175bp是怎么回事？菌落PCR鉴定时可能有假阳性，需要做阴性对照并做进一步鉴定。此外，两个引物最好是一个在目的基因上，一个在载体上，减少假阳性的几率。实在不行，你可以挑几个阳性克隆， ...

就是在酶切位点两侧的，那加上插入基因，不是应该增加的吗？嘿嘿，习惯的是这样双扩的。那我这种就是假阳性的喽？
赞一下 回复此楼
努力打败一切
3楼2013-12-24 01:20:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:26:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by yangjingjing at 2013-12-24 01:20:13
就是在酶切位点两侧的，那加上插入基因，不是应该增加的吗？嘿嘿，习惯的是这样双扩的。那我这种就是假阳性的喽？...

你用的什么marker?第一张marker看不清，第二张还可以看。从marker上估计大小不十分准确。我感觉最下面的是引物二聚体。PCR的效果不是很好，你可以试试挑阳性克隆提下质粒继续分析。
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-24 01:32:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjingjing 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭