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yangjingjing

木虫 (正式写手)

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[求助] 这个条带是肿么个情况啊？是构建成功不？已有1人参与

这个是肿么个情况啊？我的目的基因做PCR的时候，条带在500~600bp之间
Sal1和Xho1双酶切（间隔39bp）以后连接PLNCX2载体，转化后挑单菌落，菌摇起来以后制备模板，分别用目的基因引物（590bp）和载体引物（175bp）扩增，下方最亮的条带就是500bp的~~~~~~~~~实验室的SYBR显色效果越来越差啊，望见谅
为嘛目的基因扩出来的再500bp左右，载体在600bp左右了？这个是非特异吗？可是同样的，别的几个菌落为啥木有呢？

目的基因扩增.jpg

载体扩增.jpg

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努力打败一切

1楼 2013-12-23 19:42:09

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yangjingjing

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 23:17:28
说明一下你的载体上的引物175bp是怎么回事？菌落PCR鉴定时可能有假阳性，需要做阴性对照并做进一步鉴定。此外，两个引物最好是一个在目的基因上，一个在载体上，减少假阳性的几率。实在不行，你可以挑几个阳性克隆， ...

就是在酶切位点两侧的，那加上插入基因，不是应该增加的吗？嘿嘿，习惯的是这样双扩的。那我这种就是假阳性的喽？