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smd1168毕赤酵母转化问题
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划板挑单克隆菌落表面光滑，之前转化未线性化的pPIC3.5k后长出来的单克隆也是表面光滑的，后来发现质粒要线性化，结果转入线性化质粒后菌落菌落形态就变了，表面有菌丝状东西，有点像霉菌，但是是有酒香味的，难道转化进质粒后酵母形态发生变化了么？大家有没遇到过，重复2次都这个结果，万分焦急！！！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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luwei13566
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1.我转化出来的酵母和你的原菌的形态一致，你转化是用什么方法，化学法？电转化？原生质体？ 2.你用G418筛选的时候抗生素浓度加到多大的？刚才听你说还没有进行多拷贝筛选，估计你的抗性筛选是从最低浓度开始的。如果你是用电转化法转化的，建议你提高抗生素浓度进行筛选，对抑制杂菌会有点作用，空板总比染了杂菌做一轮什么都没有强。。。~~ 3.我对SMD1168不太熟悉，你线性化的是哪个位点？如果在HIS4内部的话，其实可以多一步筛选，我记得smd1168是个HIS+吧（我不确定，你看看3.5K的说明书。。。） |
7楼2013-12-24 00:06:15
luwei13566
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额，如果有菌丝了那肯定是染菌了啊，酵母的颜色改变没？赶紧去做一个镜检。丝状真菌和酵母菌肯定不一样的~， 如果你做几次都是这个样子的话,可能的原因有： 1.你的出发菌株可能已经染菌了。 2.你转化过程中染的杂菌。如果是电转化最有可能出问题的就是电转化杯，如果实在处理不好就换个试试 3.你的抗性筛选可能有问题。 其实你可以做一个菌落PCR验证一下。如果PCR验证了就直接诱导一次。管他什么形状，关键还是要出蛋白，出活性，如果不出蛋白，没有活性再考虑菌落形态的事情，因为要论证是你的线性化质粒导致菌落形态的改变是一件非常困难的事情。 |
2楼2013-12-23 00:48:42
3楼2013-12-23 08:14:08
4楼2013-12-23 12:10:05