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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 毕赤酵母相关问题
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母相关问题 已有1人参与

本人在毕赤酵母中做异源表达，用的载体是ppic9k，重组菌构建好之后表达一直没有测到酶活，胞内也没有，胞外基本看不到蛋白条带，请问有没有人遇到过类似的情况，如何解决？我现在挑选的是甲醇利用快型的，换慢型的不知道会不会有变化？
因为实验室只有这一个载体，想问一下各位虫友有没有别的载体，能否赠送或者交换一点？跪谢了！（现有的酵母有GS115和KM 71）
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1楼 2013-11-04 11:00:46
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘逸的云: 金币+2, ★有帮助 2013-11-04 16:20:09
你可以试试pPIC3.5K载体
表达出来可能活性不如9k的好
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2楼2013-11-04 15:31:43
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-11-04 15:31:43
你可以试试pPIC3.5K载体
表达出来可能活性不如9k的好

你用过这个载体吗？我要的是分泌的，3.5k貌似是不分泌的吧？能否在这个载体上加上目的基因的信号肽让它分泌呢
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3楼2013-11-04 16:19:53
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘逸的云: 金币+3, ★有帮助 2013-11-05 08:38:26
可以尝试用pPICZαA，可以尝试用发酵罐做，这样可以提高表达量
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爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:57:44
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
飘逸的云: 金币+3, 谢谢指点，我先看看尝试一下 2013-11-05 08:38:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2013-11-04 16:19:53
你用过这个载体吗？我要的是分泌的，3.5k貌似是不分泌的吧？能否在这个载体上加上目的基因的信号肽让它分泌呢...

你分泌型都表达不出来，
你用非分泌型先把它表达出来，
再考虑是否分泌的问题
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5楼2013-11-05 08:17:50
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飘逸的云

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-11-04 21:57:44
可以尝试用pPICZαA，可以尝试用发酵罐做，这样可以提高表达量

谢谢，但是我们实验室没有这个载体，请问你有吗？能否用什么你需要的换取一些？
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6楼2013-11-05 08:38:29
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Yajing223

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
渊博震天: 金币-5, 应助指数-1, 非应助帖请不要点击应助回帖，扣5个金币以示惩戒 2018-09-18 08:25:54
楼主啊，我现在也遇到这样的问题，请问后来解决了吗？楼主你还在吗？
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7楼2018-09-17 21:16:59
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