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飘逸的云

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母相关问题 已有1人参与

本人在毕赤酵母中做异源表达,用的载体是ppic9k,重组菌构建好之后表达一直没有测到酶活,胞内也没有,胞外基本看不到蛋白条带,请问有没有人遇到过类似的情况,如何解决?我现在挑选的是甲醇利用快型的,换慢型的不知道会不会有变化?
因为实验室只有这一个载体,想问一下各位虫友有没有别的载体,能否赠送或者交换一点?跪谢了!(现有的酵母有GS115和KM 71)
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飘逸的云: 金币+2, 有帮助 2013-11-04 16:20:09
你可以试试pPIC3.5K载体
表达出来可能活性不如9k的好
2楼2013-11-04 15:31:43
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-11-04 15:31:43
你可以试试pPIC3.5K载体
表达出来可能活性不如9k的好

你用过这个载体吗?我要的是分泌的,3.5k貌似是不分泌的吧?能否在这个载体上加上目的基因的信号肽让它分泌呢
3楼2013-11-04 16:19:53
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飘逸的云: 金币+3, 有帮助 2013-11-05 08:38:26
可以尝试用pPICZαA,可以尝试用发酵罐做,这样可以提高表达量
爱拼才会赢
4楼2013-11-04 21:57:44
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
飘逸的云: 金币+3, 谢谢指点,我先看看尝试一下 2013-11-05 08:38:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘逸的云 at 2013-11-04 16:19:53
你用过这个载体吗?我要的是分泌的,3.5k貌似是不分泌的吧?能否在这个载体上加上目的基因的信号肽让它分泌呢...

你分泌型都表达不出来,
你用非分泌型先把它表达出来,
再考虑是否分泌的问题
5楼2013-11-05 08:17:50
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飘逸的云

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-11-04 21:57:44
可以尝试用pPICZαA,可以尝试用发酵罐做,这样可以提高表达量

谢谢,但是我们实验室没有这个载体,请问你有吗?能否用什么你需要的换取一些?
6楼2013-11-05 08:38:29
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
渊博震天: 金币-5, 应助指数-1, 非应助帖请不要点击应助回帖,扣5个金币以示惩戒 2018-09-18 08:25:54
楼主啊,我现在也遇到这样的问题,请问后来解决了吗?楼主你还在吗?
7楼2018-09-17 21:16:59
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