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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » smd1168毕赤酵母转化问题
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kinshi

铜虫 (小有名气)

[求助] smd1168毕赤酵母转化问题

划板挑单克隆菌落表面光滑，之前转化未线性化的pPIC3.5k后长出来的单克隆也是表面光滑的，后来发现质粒要线性化，结果转入线性化质粒后菌落菌落形态就变了，表面有菌丝状东西，有点像霉菌，但是是有酒香味的，难道转化进质粒后酵母形态发生变化了么？大家有没遇到过，重复2次都这个结果，万分焦急！！！

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1楼 2013-12-22 22:57:27
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kinshi

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-23 00:48:42
额，如果有菌丝了那肯定是染菌了啊，酵母的颜色改变没？赶紧去做一个镜检。丝状真菌和酵母菌肯定不一样的~，
如果你做几次都是这个样子的话,可能的原因有：
1.你的出发菌株可能已经染菌了。
2.你转化过程中染的杂 ...

多谢回复！以为是原生菌染菌，重新划板了，转化后开始长出来很小1mm左右的菌表面是光滑的，但是长更大表面就不光滑了。至于表达，主要要筛到多拷贝后再做吧？酵母没有变色，还是白的。兄台做过这个菌株与载体一起的表达么？

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3楼2013-12-23 08:14:08
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kinshi

铜虫 (小有名气)
做酵母表达的人不少啊，咋没啥人回复呢！？刚镜检了下，划板与摇菌后菌落形态一致，转化后的单克隆融不了，吸打会付诸堵住移液枪，镜检未发现类似细胞。转化过程我与实验室同学各操作了一次，结果一样

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4楼2013-12-23 12:10:05
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kinshi

铜虫 (小有名气)
愿把所有金币赠给能解决我这问题的人！刚把转化后的单克隆挑到100微升水里，强烈涡悬后也只溶解了少部分菌，然后菌液镜检，视野下能看到一些球状，但很多是根须状，有时间换台显微镜拍照上传过来

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5楼2013-12-23 22:23:10
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kinshi

铜虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 13:35:44
单位是mg/ml还是mg/L？如果是mg/ml的话其实这一批就可以诱导了...

mg/ml，打错了。smd1168是组氨酸缺陷的，刚买的时候做过验证，单缺组氨酸长不了。参考的一篇博士论文，不过作者的载体上有yfp标记，筛选多拷贝这一步很粗略。用各溶液划板是个好方法，多谢指点！

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15楼2013-12-24 15:41:00
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kinshi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 13:26:32
1.没用过转化试剂盒~~但是刚才看了看这个试剂盒的说明书，看里面有个Reagent A培养液~估计里面的成分是一些营养物。你可以从加了A培养液培养后的菌液里吸出来一点划个线来判断下是不是试剂盒里的营养液染菌了~下面 ...

也不指望其他人能给满意答复了，能把你的转化步骤分享一份我不？悬赏金币全给你了

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16楼2013-12-24 15:44:10
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kinshi

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-24 21:50:07
我的是电转化做的，你要做吗？？...

昨天把平板打开闻了下气味，很浓的酒香味，隔壁实验室经常做酵母的同学说是酵母，问了下试剂盒的技术支持，说最好用电转，如果你方便的话可否发一份你的体系我参考下，金币先都给你了。

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19楼2013-12-26 07:57:26
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kinshi

铜虫 (小有名气)
上传网盘就可以的，如果不想公开可以设置个密码。邮箱hxswdl.2007@163.com，先谢过了！

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21楼2013-12-27 12:16:27
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