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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收产物连入克隆载体进行转化，结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿？
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douxx

新虫 (小有名气)

[交流] 胶回收产物连入克隆载体进行转化，结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿？ 已有4人参与

片段2 kb多，胶回收后连入克隆载体进行转化，结果第二天没有菌落长出，这是怎么回事儿？
载体：pEASY-T5 Zero
感受态：Trans-T1
胶回收产物连入克隆载体进行转化，结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿？
hifi 5s-10 -11回收后
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1楼 2013-12-19 10:24:52
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lidonghong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶回收后有没有跑胶确定回收产物的产率，其次连接反应时可以适当调节PCR酶切产物和载体酶切产物的比例，3：1-6：1之间
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生物化学与分子生物学
4楼2013-12-20 11:34:31
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露水无痕

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-19 17:31:35
在做一次试试吧  看抗性平板是不是拿错了 还有看感受态做得好不好？
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2楼2013-12-19 10:58:06
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 露水无痕 at 2013-12-19 10:58:06
在做一次试试吧  看抗性平板是不是拿错了 还有看感受态做得好不好？

已经做了3次以上了，结果都一样……试过T5载体，也试过Blunt载体，板子、感受态也都没问题。。。还有哪儿能出问题呢？
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3楼2013-12-20 11:29:13
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樊樊

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
全式金产品吧，带有自杀基因，百分百阳性，我刚刚用过，长得还好
体系 pcr产物：载体：水=1:1:3
我刚开始的时候，产物3微升，结果什么都不长，怀疑别的问题，寻找了2个月，某一天忽然这么试验一下就好了，后面都按这么个体系，完全ok（1.5微升就又不太好了，我也不知道为什么）

温馨小贴士：PCR产物连接前先60度水浴3--5min，立即冷却2min，然后连接，效果更好
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5楼2014-05-10 11:52:35
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