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douxx

新虫 (小有名气)

[交流] 胶回收产物连入克隆载体进行转化,结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿? 已有4人参与

片段2 kb多,胶回收后连入克隆载体进行转化,结果第二天没有菌落长出,这是怎么回事儿?
载体:pEASY-T5 Zero
感受态:Trans-T1
胶回收产物连入克隆载体进行转化,结果第二天没有菌落长出。怎么回事儿?
hifi 5s-10 -11回收后
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露水无痕

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-19 17:31:35
在做一次试试吧  看抗性平板是不是拿错了 还有看感受态做得好不好?
2楼2013-12-19 10:58:06
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douxx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 露水无痕 at 2013-12-19 10:58:06
在做一次试试吧  看抗性平板是不是拿错了 还有看感受态做得好不好?

已经做了3次以上了,结果都一样……试过T5载体,也试过Blunt载体,板子、感受态也都没问题。。。还有哪儿能出问题呢?
3楼2013-12-20 11:29:13
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lidonghong

金虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
胶回收后有没有跑胶确定回收产物的产率,其次连接反应时可以适当调节PCR酶切产物和载体酶切产物的比例,3:1-6:1之间
生物化学与分子生物学
4楼2013-12-20 11:34:31
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樊樊

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
全式金产品吧,带有自杀基因,百分百阳性,我刚刚用过,长得还好
体系 pcr产物:载体:水=1:1:3
我刚开始的时候,产物3微升,结果什么都不长,怀疑别的问题,寻找了2个月,某一天忽然这么试验一下就好了,后面都按这么个体系,完全ok(1.5微升就又不太好了,我也不知道为什么)

温馨小贴士:PCR产物连接前先60度水浴3--5min,立即冷却2min,然后连接,效果更好
5楼2014-05-10 11:52:35
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匿名

用户注销 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
6楼2015-05-31 17:32:55
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