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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR灵敏度试验，以克隆后质粒为模板，质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢 请高手指教
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福兜

新虫 (小有名气)

[求助] PCR灵敏度试验，以克隆后质粒为模板，质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢 请高手指教 已有1人参与

PCR目的基因克隆到质粒上，以该质粒为模板进行PCR反应，现在做灵敏度试验，质粒倍比稀释（ddH2O稀释）为模板，为什么倍比稀释的质粒PCR产物电泳后，条带没有逐渐变淡的趋势呢？是我质粒倍比稀释有问题吗？质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢？请高手指教
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1楼 2013-12-11 21:18:12
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-12 15:33:52
福兜: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-12 19:07:37
PCR是指数扩增，在20循环作用就基本趋近饱和，稀释的质粒在扩增达到饱和时，产物是没有多大差别的，你可以看一下PCR反应的指数增长曲线，选择一个合适的循环数吧，光靠稀释是不能比较出差别，或者你可以参考荧光定量的方法实时监测也行
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2楼2013-12-12 12:30:54
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福兜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-12 12:30:54
PCR是指数扩增，在20循环作用就基本趋近饱和，稀释的质粒在扩增达到饱和时，产物是没有多大差别的，你可以看一下PCR反应的指数增长曲线，选择一个合适的循环数吧，光靠稀释是不能比较出差别，或者你可以参考荧光定量 ...

O(∩_∩)O谢谢！
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3楼2013-12-12 19:07:53
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胖嘿嘿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 福兜 at 2013-12-12 19:07:53
O(∩_∩)O谢谢！...

您好，请问这个问题您结局了吗？我最近也比较纠结不同浓度质粒PCR后跑胶结果差不多，谢谢啊

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4楼2017-04-07 13:36:24
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