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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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福兜

新虫 (小有名气)

[求助] PCR灵敏度试验,以克隆后质粒为模板,质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢 请高手指教 已有1人参与

PCR目的基因克隆到质粒上,以该质粒为模板进行PCR反应,现在做灵敏度试验,质粒倍比稀释(ddH2O稀释)为模板,为什么倍比稀释的质粒PCR产物电泳后,条带没有逐渐变淡的趋势呢?是我质粒倍比稀释有问题吗?质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢?请高手指教
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-12 15:33:52
福兜: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-12 19:07:37
PCR是指数扩增,在20循环作用就基本趋近饱和,稀释的质粒在扩增达到饱和时,产物是没有多大差别的,你可以看一下PCR反应的指数增长曲线,选择一个合适的循环数吧,光靠稀释是不能比较出差别,或者你可以参考荧光定量的方法实时监测也行
2楼2013-12-12 12:30:54
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福兜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-12 12:30:54
PCR是指数扩增,在20循环作用就基本趋近饱和,稀释的质粒在扩增达到饱和时,产物是没有多大差别的,你可以看一下PCR反应的指数增长曲线,选择一个合适的循环数吧,光靠稀释是不能比较出差别,或者你可以参考荧光定量 ...

O(∩_∩)O谢谢!
3楼2013-12-12 19:07:53
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胖嘿嘿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 福兜 at 2013-12-12 19:07:53
O(∩_∩)O谢谢!...

您好,请问这个问题您结局了吗?我最近也比较纠结不同浓度质粒PCR后跑胶结果差不多,谢谢啊

发自小木虫Android客户端
4楼2017-04-07 13:36:24
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