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福兜

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[求助] PCR灵敏度试验，以克隆后质粒为模板，质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢请高手指教已有1人参与

PCR目的基因克隆到质粒上，以该质粒为模板进行PCR反应，现在做灵敏度试验，质粒倍比稀释（ddH2O稀释）为模板，为什么倍比稀释的质粒PCR产物电泳后，条带没有逐渐变淡的趋势呢？是我质粒倍比稀释有问题吗？质粒倍比稀释需要注意些什么问题呢？请高手指教

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1楼 2013-12-11 21:18:12

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zilinweizhu

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-12 15:33:52
福兜: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-12 19:07:37

PCR是指数扩增，在20循环作用就基本趋近饱和，稀释的质粒在扩增达到饱和时，产物是没有多大差别的，你可以看一下PCR反应的指数增长曲线，选择一个合适的循环数吧，光靠稀释是不能比较出差别，或者你可以参考荧光定量的方法实时监测也行

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2楼2013-12-12 12:30:54

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福兜

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-12 12:30:54
PCR是指数扩增，在20循环作用就基本趋近饱和，稀释的质粒在扩增达到饱和时，产物是没有多大差别的，你可以看一下PCR反应的指数增长曲线，选择一个合适的循环数吧，光靠稀释是不能比较出差别，或者你可以参考荧光定量 ...

O(∩_∩)O谢谢！

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3楼2013-12-12 19:07:53

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