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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 土壤DNA提出然后PCR，跑出的条带不单一，有四条是什么原因
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墨玉快乐就好

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤DNA提出然后PCR，跑出的条带不单一，有四条是什么原因

土壤DNA提出然后PCR，跑出的条带不单一，一个样品上有四条亮袋是什么原因？我选择的是真菌通用引物ITS1和ITS4，25微升体系，是不是引物选择不何时，还是代表微生物多？希望大家帮忙解决下，非常感谢
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1楼 2013-11-05 19:56:04
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wxj1986317

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-28 12:46:25
提取的是土壤DNA，那土壤中肯定不止有一种真菌，你所用的是真菌通用引物，那是真菌都有可能被P出来，不同真菌的条带长度有差异，出现不同条带很正常啊。你试试分离纯化后一一提取测序。
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3楼2013-11-08 10:54:07
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胖胖二妮子

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果这四条里面有你要的长度的话就提高下退火温度吧。
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2楼2013-11-08 10:14:27
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爆肝熊熊

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-28 12:46:29
首先三楼说的不对，不管用什么universal primer都不会得到很多带。
四条亮带的话，我不知道band的强弱，如果能上图的话最好。我觉得可以考虑1，降低下DNA template的浓度，2，降低镁离子的浓度，3，考虑调整PCR条件。
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4楼2013-11-28 11:03:41
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