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细胞提蛋白做western blot 已有1人参与
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我要提取细胞蛋白做western blot，使用6孔板培养细胞，请问高手们： 1.每培养瓶的细胞可以接种几个孔，每孔一般需要细胞数多少，加样多少ml？ 2.提蛋白最少需要蛋白的量是多少？ |
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daibingling
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4楼2013-10-17 11:40:53
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-31 13:06:02
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-31 13:06:02
| 铺板密度取决于你所养细胞的生长情况，可以做个预实验，铺几个密度，看看从铺板到你做实验哪个密度比较适合，所谓适合，就是细胞长满但是不挤。一般6孔板的一个孔，肿瘤细胞铺2乘10的5次方个，长两天左右，达到10的6次方以上就可以提蛋白做实验了，6孔板一般加2毫升培养基。如按前面所说的密度，提蛋白时6孔板的一个孔把细胞收集后加裂解液60-90微升，电泳时上样20-30微升，蛋白量足够。一般生长速度的细胞，一个T25的瓶长满但不挤的情况下，铺一块6孔板，剩下的继续培养是足够的。新手没做过，最好还是计数，最好测蛋白浓度，认真记录实验条件，以后才有经验，才能粗略估算。祝实验顺利！ |
5楼2013-10-31 11:03:47
6楼2013-11-26 10:50:30
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