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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞提蛋白做western blot
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duke188

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞提蛋白做western blot已有1人参与

我要提取细胞蛋白做western blot，使用6孔板培养细胞，请问高手们：
1.每培养瓶的细胞可以接种几个孔，每孔一般需要细胞数多少，加样多少ml？
2.提蛋白最少需要蛋白的量是多少？
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1楼2013-10-17 09:39:47
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Ranen516

金虫 (正式写手)
2万个细胞每孔，不知道一瓶能种几个！加2ml左右培养基！
培养到细胞长满就可以了！量嘛！不太清楚！
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8楼2013-12-15 18:05:39
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-17 10:38:41
接种细胞数量是以阴性孔在药物作用时间后，可以长满为合适。为了保证蛋白量，提蛋白时可以浓点，通过BCA检测蛋白浓度，控制上样蛋白浓度就可以了。
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2楼2013-10-17 10:06:20
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-17 10:06:20
接种细胞数量是以阴性孔在药物作用时间后，可以长满为合适。为了保证蛋白量，提蛋白时可以浓点，通过BCA检测蛋白浓度，控制上样蛋白浓度就可以了。

新手第一次做，给我个大概的量呗
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3楼2013-10-17 10:30:59
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daibingling

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by duke188 at 2013-10-17 10:30:59
新手第一次做，给我个大概的量呗...

上样量蛋白20-40微克就可以
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4楼2013-10-17 11:40:53
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