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liuxuedong916

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做western blot时,细胞的要求 已有12人参与

由于提蛋白和western blot都要送出去做,所以有几个问题不清楚
诸如:细胞的个数、细胞在提蛋白前放置时间及放置条件
请给出详细说明
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sunyongle1

木虫 (正式写手)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
细胞还是多给点吧,如果是10*7 cells/ml的话,给个10-20ml肯定足矣。如果你说提蛋白也是给别人的话,那就把细胞离心收集下来,包上锡箔纸里,然后放在液氮里,送给他们。细胞放在液氮之前时间越短越好

[ Last edited by sunyongle1 on 2010-7-22 at 20:36 ]
2楼2010-07-22 20:31:14
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kpyy

金虫 (正式写手)

完美孤独


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
这个我也不太清楚,不好意思哦
随着岁月的流逝成长
3楼2010-07-22 20:33:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
10^5个细胞就差不多能做出中高丰度的蛋白了
如果送出去做,建议提取了蛋白后再送,然后那边给你做定量再跑电泳。冰上运输过去就好了。
4楼2010-07-22 21:08:50
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开心联盟

银虫 (正式写手)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
http://litao1981923.blog.163.com ... 183201022112259667/
这个博客不错·~进去看看吧··
小木虫单身部落群号:34429325。欢迎单身虫友加入~执子之手,与子偕老。
5楼2010-07-22 21:24:23
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henkally

禁虫 (著名写手)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

6楼2010-07-22 23:02:11
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ryanhaozi

铜虫 (小有名气)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
细胞一定要长的好一些再给过去,尽量要保持低温,应该不难的
7楼2010-07-22 23:13:06
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zal

木虫 (正式写手)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
如果是做western blot用的细胞,当然是新鲜的细胞好了,细胞数尽量多一些,有时一次实验未必有结果,所以多给两瓶比较好!
欲求其上,必先上上
8楼2010-07-22 23:38:49
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zx314

金虫 (职业作家)


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
要看你做什么蛋白,有些单白细胞内表达很高,不用太多,有些表达量很低(例如磷酸化的)就要很多80%-90%
9楼2010-07-29 14:59:03
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


liuxuedong916(金币+2):谢谢参与
细胞长满后,收集,离心,-70冻存,干冰运输,
10楼2010-07-29 15:05:57
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