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duke188

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞提蛋白做western blot 已有1人参与

我要提取细胞蛋白做western blot,使用6孔板培养细胞,请问高手们:
1.每培养瓶的细胞可以接种几个孔,每孔一般需要细胞数多少,加样多少ml?
2.提蛋白最少需要蛋白的量是多少?
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zhouhuana

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

接板的密度一般根据你自己的细胞而定。等细胞长满板底就可以提蛋白了,建议每组至少设两个孔,,每孔加40ul裂解液,这样可以确保蛋白浓度。提完蛋白需要进行蛋白定量。
春有百花秋有月,夏有清风冬有雪。岁月无论你怎样变迁我依然爱你。
9楼2013-12-17 12:39:57
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-17 10:38:41
接种细胞数量是以阴性孔在药物作用时间后,可以长满为合适。为了保证蛋白量,提蛋白时可以浓点,通过BCA检测蛋白浓度,控制上样蛋白浓度就可以了。
2楼2013-10-17 10:06:20
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duke188

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-17 10:06:20
接种细胞数量是以阴性孔在药物作用时间后,可以长满为合适。为了保证蛋白量,提蛋白时可以浓点,通过BCA检测蛋白浓度,控制上样蛋白浓度就可以了。

新手第一次做,给我个大概的量呗
3楼2013-10-17 10:30:59
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daibingling

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by duke188 at 2013-10-17 10:30:59
新手第一次做,给我个大概的量呗...

上样量蛋白20-40微克就可以
4楼2013-10-17 11:40:53
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